Ribozyme Mediated gRNA Generation for In Vitro and In Vivo CRISPR/Cas9 Mutagenesis.
Ribozyme Mediated gRNA Generation for In Vitro and In Vivo CRISPR/Cas9 Mutagenesis.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0166020
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Ingham PW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lee RT;Ng AS;Ingham PW
CRISPR/Cas9现在经常用于在各种系统中进行靶向突变。在这里，我们报告了使用核酶在体外和斑马鱼胚胎中产生gRNAs。我们发现，核酶的加入增加了可用于突变的启动子的类型和靶点的数量，而不会影响突变效率。我们已经通过比较有和没有核酶的gRNA构建体的突变效率来测试这一点，并使用能够诱导其目标突变的热休克启动子(RNA聚合酶II依赖的启动子)产生了表达gRNA的转基因斑马鱼。我们的方法提供了一种简化的方法来测试gRNA效率，并增加了斑马鱼条件基因敲除的通用性。
CRISPR/Cas9 is now regularly used for targeted mutagenesis in a wide variety of systems. Here we report the use of ribozymes for the generation of gRNAs both in vitro and in zebrafish embryos. We show that incorporation of ribozymes increases the types of promoters and number of target sites available for mutagenesis without compromising mutagenesis efficiency. We have tested this by comparing the efficiency of mutagenesis of gRNA constructs with and without ribozymes and also generated a transgenic zebrafish expressing gRNA using a heat shock promoter (RNA polymerase II-dependent promoter) that was able to induce mutagenesis of its target. Our method provides a streamlined approach to test gRNA efficiency as well as increasing the versatility of conditional gene knock out in zebrafish.
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影响因子：
7
作者：
Auer TO;Duroure K;De Cian A;Concordet JP;Del Bene F
通讯作者：
Del Bene F
DOI：
10.1016/j.bbagrm.2012.10.006
发表时间：
2013-03
影响因子：
4.7
作者：
Arimbasseri, Aneeshkumar G.;Rijal, Keshab;Maraia, Richard J.
通讯作者：
Maraia, Richard J.
DOI：
10.1073/pnas.1308335110
发表时间：
2013-08-20
影响因子：
11.1
作者：
Jao, Li-En;Wente, Susan R.;Chen, Wenbiao
通讯作者：
Chen, Wenbiao
DOI：
10.1093/dnares/dss023
发表时间：
2012-10
期刊：
DNA research : an international journal for rapid publication of reports on genes and genomes
影响因子：
--
作者：
Chen J;Zhang X;Wang T;Li Z;Guan G;Hong Y
通讯作者：
Hong Y
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--