单增李斯特菌谷氧还蛋白调控氧化应激相关基因转录的研究
单增李斯特菌谷氧还蛋白调控氧化应激相关基因转录的研究
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DOI：
10.3969/j.issn.1008-0589.202211015
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
程昌勇
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张念琦;孙静;宋厚辉;卫芳芳;陈绵绵;程昌勇
本实验室前期对单增李斯特菌(LM)谷氧还蛋白(Grx)转录组数据进行了分析,在此基础上为了对Grx调控细胞色素氧化酶等应激相关基因(lmo0722、qoxA、qoxB、gr)的转录及其作用机制研究,本研究将Δgrx与野生株EGD-e经4 mmol/L肼应激后,分别提取总RNA并反转录为cDNA作为模板,利用RT-qPCR检测Grx调控细胞色素氧化酶等应激相关基因转录情况,结果显示,Δgrx与野生株EGD-e相比,grx基因缺失引起qoxB、qoxA、gr、 lmo0722等基因的转录水平显著上调(分别上调30、29、17和5.6倍)。利用李斯特菌穿梭质粒构建携带调控基因启动子序列的gfp报告质粒,电转化至野生株EGD-e和缺失株Δgrx感受态细胞中,获得含GFP的重组报告菌株。将这两种含GFP的重组报告菌液分别加入4 mmol/L肼后检测荧光强度,结果显示,EGD-e携带的GFP荧光数值显著低于缺失株Δgrx (P<0.01),进一步表明Grx参与调控上述应激相关基因的转录。将扩增的lmo0722、qoxA、qoxB和gr基因的启动子和Grx、PrfA和GAPDH重组蛋白混合,37 ℃孵育60 min后进行凝胶迁移试验(EMSA),结果显示, Grx和上述调控基因启动子不直接结合,提示Grx可能通过间接方式参与该调控过程。本研究首次证实LM Grx通过对氧化应激相关基因的转录调控进而在细菌抗氧化应激环境适应过程中发挥重要作用,为系统阐述重要食源性病原菌在环境适应中发挥作用的调控机制提供了科学参考。