Identification and biochemical characterization of the ligand binding domain of the collagen adhesin from Staphylococcus aureus.
Identification and biochemical characterization of the ligand binding domain of the collagen adhesin from Staphylococcus aureus.
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金黄色葡萄球菌胶原粘附素配体结合域的鉴定和生化特征。
DOI：
10.1021/bi00093a021
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发表时间：
1993
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Höök,M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Patti,JM;Boles,JO;Höök,M
摘要：我们最近已经表明，胶原粘附素的表达对于介导金黄色葡萄球菌附着于软骨（一种复杂的含胶原基质）是必要的且足够的[Switalski，LM，Patti，J.M.，屠夫，W.，Gristina，A. G.，Speziale，P.，& Hook，M.（1993）Mol. Microbiol. 7，99-107]。我们现在报告的135 kDa的S内的配体结合位点的定位。金黄色胶原粘附素。使用缺失诱变结合Western配体印迹和直接结合测定，胶原结合结构域（CBD）定位于粘附素N-末端部分内的168个氨基酸长的片段[CBD（151-318）]。使用生物特异性相互作用分析，发现胃蛋白酶消化的牛II型胶原蛋白含有八个CBD结合位点（151-318）;两个结合位点具有“高”亲和力（Ka= 3/iM），六个位点具有低亲和力（Ka= 30/iM）。在CBD的末端侧翼区域（151-318）的短截短导致两个CBD（180-318和151-297）缺乏胶原结合活性。通过圆二色性分析的recombinantCBD在远紫外显示类似的二级结构，主要是/3-折叠，而近紫外光谱表明分子间的包装（三级结构）的程度的显着变化。推导的氨基酸序列的配体结合结构域的胶原粘附素。
Revised Manuscript Received August 10, 1993• abstract: We have recently shown that the expression of a collagen adhesin is both necessary and sufficient to mediate the attachment of Staphylococcus aureus to cartilage, a complex collagen-containing substrate [Switalski, LM, Patti, J. M., Butcher, W., Gristina, A. G., Speziale, P., & Hook, M.(1993) Mol. Microbiol. 7, 99-107]. We now report on the localization of the ligand binding site within the 135-kDa S. aureus collagen adhesin. Using deletion mutagenesis in combination with Western ligand blot and direct binding assays, the collagen binding domain (CBD) was localized to a 168 amino acid long segment [CBD (151-318)] within the N-terminal portion of the adhesin. Using biospecific interaction analysis, pepsin-digested bovine type II collagen was found to contain eight binding sites for CBD (151-318); two binding sites were of “high” affinity (Ka= 3/iM) and six sites were of low affinity (Ka= 30/iM). Short truncations in the terminal flanking regions of CBD (151-318) resulted in two CBDs (180-318 and 151-297) that lacked collagen bindingactivity. Analysis by circular dichroism of the recombinantCBDs in the far UV revealed similar secondary structures, predominantly/3-sheet, whereas the near-UV spectra indicated dramatic changes in the degree of intermolecular packing (tertiary structure). The deduced amino acid sequence of the ligand binding domain of the collagen adhesin is presented.
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