Studies on early proteins and transformation proteins of human adenoviruses.
Studies on early proteins and transformation proteins of human adenoviruses.
复制标题
人类腺病毒早期蛋白和转化蛋白的研究。
DOI：
10.1101/sqb.1980.044.01.049
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发表时间：
1980
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Cartas,MA
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Green,M;Wold,WS;Brackmann,K;Cartas,MA
腺病毒 2 (Ad2) 的早期基因在感染后 6-7 小时开始病毒 DNA 合成之前转录（Green et al. 1971）。早期基因分布在四个不连续的基因区域，称为El-E4（Flint等人，1975、1976；Flint和Sharp，1976；Biittner等人，1976；Craig和Raskas，1976；Chow等人，1977；Evans等人，1977；Berk和Sharp，1978a）。（见图1 Ad2 基因组的物理和遗传组织图。）块 E1 和 E3 分别位于近似图单元 1.5-11 和 76-86 内，并以向右方向转录。 E2和E4分别位于近似地图单元62--68和92-98内，并且沿向左方向转录。 Ad2 的 E1（以及密切相关的 Ad5）是了解真核基因表达和病毒细胞转化的重要模型。 El中的至少两个区域，1.5-4.5和4.5-11图谱单元，编码两个或多个重叠剪接的mRNA（Kitchingman等人，1977年；Berk和Sharp，1978a；Spector等人，1978年；LT Chow等人，个人通讯）。由于 E1 可能主要通过细胞机制转录，因此绘制 E1 中的基因图谱并分析其 mRNA 和多肽产物可能有助于深入了解细胞基因的组织和表达。 E1 更令人感兴趣，因为它包含用于 Ad2 细胞转化的 DNA 序列（Gallimore 等人，1974 年；van der Eb 等人，1977 年）。所有 Ad2 转化细胞均从该区域合成 mRNA（Flint 等人，1975；Bachenheimer 和 Darnell 1976；Chinnadurai 等人，1976、1978），以及与几种 Ad2 早期蛋白免疫相关的蛋白质（Gilead 等人，1976；Levinson 和 Levine，1977；Johansson 等人，1978；Emerson 等人，1978）。沃尔德和格林 1979）。这些观察结果，以及在 E1 中绘制的 Ad2 转化缺陷突变体（Graham 等，1978）的分离（Frost 和 Williams 1978），表明该区域编码的蛋白质在 Ad2 细胞转化中发挥作用。使用两种方法来识别这些蛋白质并绘制它们的基因图谱。首先，通过与DNA限制性片段杂交选择的病毒mRNA的体外翻译绘制了几种38K-51K多肽（Lewis等人，1976；Lupker等人，1977；Harter和Lewis，1978；Halbert等人，1979）、14K多肽（Lupker等人，1977）和28K多肽（Halbert等人，1979）。图谱单位 1.5--4.5（指定为 E1A）、图谱单位 4.5-11 内的 15K 多肽（Lewis 等人，1976；Halbert 等人，1979）和 52K 多肽（Halbert 等人，1979）（指定为 E1B），以及图谱单位 9.5-11 内的 12K 多肽（Pettersson 和 Mathews） 1977）。鉴定和绘制E1多肽图谱的第二种方法是使用针对仅保留E1的Ad2或Ad5转化细胞的抗血清对[3SS]甲硫氨酸标记的多肽进行免疫沉淀。我们用针对FI7细胞(Gilead等人1976)、Ad2转化的大鼠细胞系(Gallimore 1974)的抗血清沉淀了53K和15K多肽。 Levinson 和 Levine (1977) 鉴定了 Ad5 特异性 58K 多肽。
The early genes of adenovirus 2 (Ad2) are transcribed before initiation of viral DNA synthesis at 6-7 hours postinfection (Green et al. 1971). The early genes are distributed in four noncontiguous gene regions, designated El-E4 (Flint et al. 1975, 1976; Flint and Sharp 1976; Biittner et al. 1976; Craig and Raskas 1976; Chow et al. 1977; Evans et al. 1977; Berk and Sharp 1978a).(See Fig. 1 for a diagram of the physical and genetic organization of the Ad2 genome.) Blocks E1 and E3 are located within approximate map units 1.5-11 and 76-86, respectively, and are transcribed in the rightward direction. E2 and E4 are located within approximate map units 62--68 and 92-98, respectively, and are transcribed in the leftward direction. E1 of Ad2 (and closely related Ad5) is a model important to the understanding of eukaryotic gene expression and viral cell transformation. At least two areas in El, 1.5-4.5 and 4.5-11 map units, code for two or more overlapping spliced mRNAs (Kitchingman et al. 1977; Berk and Sharp 1978a; Spector et al. 1978; LT Chow et al., pers. comm.). Because E1 is probably transcribed mainly by cell mechanisms, mapping the genes in E1 and analysis of their mRNA and polypeptide products may provide insights into the organization and expression of cellular genes. E1 is of further interest because it contains the DNA sequences for Ad2 cell transformation (Gallimore et al. 1974; van der Eb et al. 1977). All Ad2-transformed cells synthesize mRNA from this region (Flint et al. 1975; Bachenheimer and Darnell 1976; Chinnadurai et al. 1976, 1978), as well as proteins that are immunologically related to several Ad2 early proteins (Gilead et al. 1976; Levinson and Levine 1977; Johansson et al. 1978; Wold and Green 1979). These observations, and the isolation of Ad2 transformationdefective mutants (Graham et al. 1978) that map in E1 (Frost and Williams 1978), suggest that proteins coded by this region play a role in Ad2 cell transformation. Two approaches were used to identify these proteins and to map their genes. First, in vitro translation of viral mRNA selected by hybridization to DNA restriction fragments mapped several 38K-51K polypeptides (Lewis et al. 1976; Lupker et al. 1977; Harter and Lewis 1978; Halbert et al. 1979), a 14K polypeptide (Lupker et al. 1977) and a 28K polypeptide (Halbert et al. 1979) within map units 1.5--4.5 (designated E1A), a 15K polypeptide (Lewis et al.1976; Halbert et al. 1979) and a 52K polypeptide (Halbert et al. 1979) within map units 4.5-11 (designated E1B), and a 12K polypeptide within map units 9.5-11 (Pettersson and Mathews 1977). A second approach to identifying and mapping E1 polypeptides is immunoprecipitation of [3SS] methionine-labeled polypeptides using antisera against Ad2-or Ad5-transformed cells that retain only El. We precipitated 53K and 15K polypeptides with antiserum against FI7 cells (Gilead et ai. 1976), a line of Ad2-transformed rat cells (Gallimore 1974). Levinson and Levine (1977) identified an Ad5-specific 58K polypeptide.