MUC1 mucin interacts with calcium-modulating cyclophilin ligand.
MUC1 mucin interacts with calcium-modulating cyclophilin ligand.
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DOI：
10.1016/j.biocel.2008.12.004
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发表时间：
2009-06
影响因子：
4
通讯作者：
Lillehoj, Erik P.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Guang, Wei;Kim, K. Chul;Lillehoj, Erik P.
MUC1 是一种在上皮细胞和造血细胞上表达的整合膜糖蛋白，具有介导细胞内信号转导的 COOH 末端 (CT)。为了更好地了解 MUC1 依赖性信号传导，我们使用酵母双杂交系统，以 MUC1 CT 作为诱饵，以人上皮细胞 cDNA 文库作为猎物，寻找与其 CT 结合的蛋白质。在鉴定出的 6 个阳性克隆中，全部编码钙调节亲环蛋白配体 (CAML)。通过在选择性培养基上的生长和原位 X-α-半乳糖苷酶活性揭示了 MUC1 CT 与转化酵母细胞中的 CAML 相互作用。通过免疫共沉淀、共聚焦显微镜、蛋白质交联和偶联转录/翻译分析证实了 MUC1 CT 与人上皮细胞中 CAML 的结合。通过缺失诱变，CAML 的 NH2 末端负责与 MUC1 CT 结合。最后，与单独转染任一质粒的细胞相比，用编码 MUC1 和 CAML 的质粒转染细胞增加了细胞内钙水平，这表明 MUC1-CAML 相互作用可能具有生物学意义。
MUC1 is an integral membrane glycoprotein expressed on epithelial and hematopoietic cells with a COOH-terminus (CT) that mediates intracellular signal transduction. To better understand MUC1-dependent signaling, we searched for proteins binding to its CT using the yeast two-hybrid system with the MUC1 CT as bait and a human epithelial cell cDNA library as prey. Of the six positive clones identified, all encoded calcium-modulating cyclophilin ligand (CAML). The MUC1 CT interacted with CAML in transformed yeast cells as revealed by growth on selective media and in situ X-α-galactosidase activity. Binding of the MUC1 CT to CAML in human epithelial cells was confirmed by reciprocal coimmunoprecipitations, confocal microscopy, protein crosslinking, and coupled transcription/translation analyses. By deletion mutagenesis, the NH2-terminus of CAML was responsible for binding to the MUC1 CT. Finally, transfection of cells with plasmids encoding MUC1 and CAML increased intracellular calcium levels compared with cells transfected with either plasmid alone, suggesting a possible biological significance of the MUC1-CAML interaction.
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