羽衣甘蓝类蛋白质二硫键异构酶PDIL1-2的基因克隆及蛋白表达分析
羽衣甘蓝类蛋白质二硫键异构酶PDIL1-2的基因克隆及蛋白表达分析
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DOI：
10.7525/j.issn.1673-5102.2020.02.017
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
蓝兴国
中科院分区：
文献类型：
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作者：
李阳;施亚坤;高士科;李晓屿;蓝兴国
以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var. acephala)自交不亲和系(S13-bS13-b)为试材,利用RT-PCR和RACE的方法从柱头中分离类蛋白质二硫键异构酶BoPDIL1-2基因。将BoPDIL1-2编码区的序列构建到原核表达载体PET-14b上,并转化到大肠杆菌中进行原核表达与纯化;用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备BoPDILl-2多克隆抗体;通过免疫印迹法检测BoPDILl-2在不同组织及不同发育阶段柱头的表达情况。氨基酸序列比对分析结果显示,羽衣甘蓝BoPDILl-2与油菜BnPDILl-2、拟南芥AtPDILl-2的一致性分别是97. 3%和85. 5%。SDS-PAGE结果显示,在分子量58 kD处有BoPDILl-2蛋白特异性地诱导表达。免疫印迹结果显示BoPDILl-2在羽衣甘蓝柱头中特异表达,而且在柱头发育早期表达量较低,在开花期柱头表达量较高。