Renale Claudine und ihre Interaktionen

Jedes Epithel zeichnet sich dch ein type isches Expressionsmer von Claudinen，Einer Familie von Strong Junction(TJ)Proteinen，Aus.在TJ bstiminans diese Claudine duch Wechselwirkung MIT benachbarten Claudinen innerhalb der selben zellmenan(Cis)der Mempaen der Nachbarzellen(Trans)die parazellulären permeablitätseigenschaften des Epithels.Zudem Mehren Sich die Hinweise，dass Claudine Nicht nur den Parazellulären Transport，sondern duch Interaktionen MIT Lonenkanälen auch den Transzellulären Transport Regieren könnnen.Zil des Teilprojektes is zum einen die分析der cis-and tran-interaktionen nierentypischer Claudine，zum and deren die aufklärung der Interaktion von Claudins-16 MIT DEM apikalen CL-Kanal Bestrophin.本实验采用MDCK C7-Zellen duchgeführt和Herstellung von Claudin-Chimären duch Austausch des 2.Extrazellulären Loop，Fucreszenzoptische Untersuhugen von YFP-BZW.CFP-markierten Claudinen und Gefrierbruch-Elektronenmikroskopischene分析方法。在MDCK-C7-Zellen MIT和MDCK-C7-Zellen MIT中，Bestrophin-Isoformen 1和4在MDCK-C7-Zellen MIT中共表达。在此基础上，对其电生理特性和数量进行了研究。

Jedes Epithel zeichnet sich durch ein typisches Expressionsmuster von Claudinen, einer Familie von Tight Junction (TJ) Proteinen, aus. In den TJ bestimmen diese Claudine durch Wechselwirkung mit benachbarten Claudinen innerhalb der selben Zellmembran (cis) und der Membranen der Nachbarzellen (trans) die parazellulären Permeabilitätseigenschaften des Epithels. Zudem mehren sich die Hinweise, dass Claudine nicht nur den parazellulären Transport, sondern durch Interaktionen mit lonenkanälen auch den transzellulären Transport regulieren können. Ziel des Teilprojektes ist zum einen die Analyse der cis- und trans- Interaktionen nierentypischer Claudine, zum anderen die Aufklärung der Interaktion von Claudins-16 mit dem apikalen Cl-Kanal Bestrophin. Die Experimente werden an einfach- und doppelttransfizierten MDCK C7-Zellen durchgeführt und beinhalten die Herstellung von Claudin-Chimären durch Austausch des 2. extrazellulären Loops, fluoreszenzoptische Untersuchungen von YFP- bzw. CFP-markierten Claudinen und Gefrierbruch- Elektronenmikroskopischene Analyse der gebildeten TJ. Die Untersuchungen der Wechselwirkung zwischen Claudin-16 und den beiden Bestrophin-Isoformen 1 und 4 werden mittels Überexpression bzw. knock-down (siRNA) der Bestrophine in MDCK-C7-Zellen mit oder ohne Claudin-16-Coexpression durchgeführt. Die funktionellen Auswirkungen aller untersuchten Interaktionen werden elektrophysiologisch charakterisiert und quantifiziert.