Korrelatives Kryo-Konfokalfluoreszenzmikroskop

Beanregt将使用激光扫描荧光技术(LSM)和Kryo-Einheit(冷冻阶段)zur konfokalmikroskopischen Untersusuung玻璃化仪Weicher，vvendend生物分析仪材料-负196°C和Kryo-Einheit(Kryo-EM)和Kryo-Transmissiontronentie(Kryo-et)。它的玻璃化程度，在Flüssigem Stickstoff befindlicheen Proben Sollen in die Kryo-Einheit eingeführt，be77K konfokal，MIT max auflöSong(Hoher Numeriser Aperture)，Einzelmolekül荧reszenzzempfindlichkeit，Guter Spektraler Diskrimini erung，vollstänDiger(Durch Monage Aller Er Sinhtbereiche)，Unter Erfassung Netzehen-Topgraph，in die reichend细节，Stunkroskopiert and zurücküden Flüssign STamticoff STamkticoff，Gter Spektraler Diskriminerung Diskrimini erung，vollstänDiger(Dass)Devitizoung Ekisoneont，Unter Erfassung Netzehender-Topgraph，in die reichichend，Stunden mikroskopiert and zcküin den flüssigen STamticoff STamkticoff，Vollst Spektraler Diskrimierder Diskrimini erung，Vollständiger(Durch)Erfassung Netzeen-Seen-Topgraph，Unter erfassung Netzeen der Netzeen-Topgraph，Unter ter fassung Erfassung Netzeen-Topopiert，Unötigenens Folersüstden Stmikroskopiert and zurückünnünöfgünönöflöSong(Hoher‘s nüssigk nAblauf soll das Aufuchenen der Interessanten Stellen(POI)，das Wiederfinden der POI imübersichtsbild im Kryo-EM(MIT Der Software SerialEM)Mittels Korrelationvon MerkMalen(地标)and Zuordnung der Kooderten Lauben(地标)和Zuordnung der Kodisten Lauben(地标)。最终得到了35 nm的误差。上海站是一家大型运输公司，负责运输和运输企业的动力。AfgekläRT是Sollen die Rolle der GTP-Proteinse，der Machismus der Vesikelabschnürung and die Auswirkungen von Cargo-Proteinen。

Beantragt wird ein aufrechtes konfokales Laser-Scanning-Fluoreszenzmikroskop (LSM) mit einer Kryo-Einheit (cryo­stage) zur konfokalmikroskopischen Untersuchung vitrifizierter weicher, vorwiegend biologischer Materie bei minus 196°C und korrelierter Bildgebung und Strukturaufklärung derselben Proben mit Kryo-Transmissionselektronen­mikroskopie (Kryo-EM) und Kryo-Transmissionselektronentomographie (Kryo-ET). Die auf EM-Netzehen (grids) bereits vitrifizierten, in flüssigem Stickstoff befindlichen Proben sollen in die Kryo-Einheit eingeführt, bei 77K konfokal, mit maximaler Auflösung (hoher numerischer Apertur), Einzelmolekülfluoreszenzempfindlichkeit, guter spektraler Diskriminierung, vollständig (durch Montage aller Sichtbereiche), unter Erfassung der Netzehen-Topographie, aber auch in ausreichend Detail, nötigenfalls über Stunden mikroskopiert und zurück in den flüssigen Stickstoff verbracht werden, ohne dass Devitrifizierung oder Eiskontamination eintritt. Der Ablauf soll das Aufsuchen der interessanten Stellen (POi), das Wiederfinden der POi im Übersichtsbild im Kryo-EM (mit der Software SerialEM) mittels Korrelation von Merkmalen (landmarks) und Zuordnung der Koordinaten erlauben. Final soll eine Korrelationspräzision zwischen Fluoreszenz-und EM-Bild von 35 nm erreicht werden. Hauptanwendung ist die Aufklärung grundlegender Fragen des intrazellulären Transports am Beispiel des dynamischen COPII-Vesikelbildungsprozesses. Aufgeklärt werden sollen die Rolle der GTP-Hydrolyse, der Mechanismus der Vesikelabschnürung und die Auswirkungen von Cargo-Proteinen.