ケラチン線維と核膜との結合を媒介するオクリビン蛋白の機能解析

ヒト表皮角化細胞内のケラチン線維と核膜との結合を媒介する蛋白として分離同定されたオクリビンに対し、特異的に認識する抗体の作成を試みた。オクリビンを構成するアミノ酸の中から複数の領域を選択して約20アミノ酸からなるペプチドを合成、ウサギに接種しオクリビン抗血清を作成した。免疫染色、ウエスタンブロット法からオクリビンを特異的に認識する抗体を作成し得たと判断した。その抗体を用いてヒト有棘細胞を免疫染色したところ、ケラチンとの2重染色では核膜領域において共存している像が得られた。また核膜内膜蛋白、外膜蛋白、角膜孔蛋白、小胞体蛋白それぞれとの2重染色からオクリビンは核膜外膜に主に存在し、核内膜や小胞体にはほとんど存在しないことがわかった。次にsiRNAの手法を用いてオクリビン遺伝子の発現を阻害し、細胞内ケラチンの機能発現におけるオクリビンの果たす役割につき検討を試みた。オクリビンの遺伝子配列の中から適当な部位を選び、siRNAの細胞内への取り込みを確認するため5'末端側に蛍光色素をつけた2重鎖RNAを作成した。ヒト有棘細胞にこのsiRNAを取り込ませ、ケラチン線維の走行を確認したところ、ケラチン線維が核膜を取り囲むように走行する通常の状態に対し、siRNA取り込み細胞では核膜への関わりが若干薄い像が得られた。以上の結果からオクリビンはケラチンと核膜の結合に重要な役割を果たしていると考えられた。しかしながらsiRNA取り込み後の時間経過とケラチンの走行との関係、及びオクリビンが多数含有する核移行シグナルを阻害した場合のケラチン線維の走行変化から、核移行シグナルの持つ意味合いの追求という課題が残った。

ヒト表皮角化細胞内のケラチン線維と核膜との結合を媒介する蛋白として分離同定されたオクリビンに対し、特異的に認識する抗体の作成を試みた。オクリビンを構成するアミノ酸の中から複数の領域を選択して約20アミノ酸からなるペプチドを合成、ウサギに接種しオクリビン抗血清を作成した。免疫染色、ウエスタンブロット法からオクリビンを特異的に認識する抗体を作成し得たと判断した。その抗体を用いてヒト有棘細胞を免疫染色したところ、ケラチンとの2重染色では核膜領域において共存している像が得られた。また核膜内膜蛋白、外膜蛋白、角膜孔蛋白、小胞体蛋白それぞれとの2重染色からオクリビンは核膜外膜に主に存在し、核内膜や小胞体にはほとんど存在しないことがわかった。次にsiRNAの手法を用いてオクリビン遺伝子の発現を阻害し、細胞内ケラチンの機能発現におけるオクリビンの果たす役割につき検討を試みた。オクリビンの遺伝子配列の中から適当な部位を選び、siRNAの細胞内への取り込みを確認するため5'末端側に蛍光色素をつけた2重鎖RNAを作成した。ヒト有棘細胞にこのsiRNAを取り込ませ、ケラチン線維の走行を確認したところ、ケラチン線維が核膜を取り囲むように走行する通常の状態に対し、siRNA取り込み細胞では核膜への関わりが若干薄い像が得られた。以上の結果からオクリビンはケラチンと核膜の結合に重要な役割を果たしていると考えられた。しかしながらsiRNA取り込み後の時間経過とケラチンの走行との関係、及びオクリビンが多数含有する核移行シグナルを阻害した場合のケラチン線維の走行変化から、核移行シグナルの持つ意味合いの追求という課題が残った。