Molecular mechanisms of SNARE-patterning

Neuronalen Excytose bildet das vesikuläre SNARE SNARE-Protein Synaptobrevin-2 Komplexe MIT Den Momplex Mit Den Momplex Mit Momplexe SNAP-25，Wodurch die Fusionsreaktion eingeleitet wird.这是一种新的生活方式，它是一种生活方式，是一种生活方式。Um die räumliche Anordnung von Snars and Snare-Branded Proteinen zu unteruchenen，haben wir ein Verfahren zur Herstellung von Platmammammammmaan-Rasen Aus PC12-Zellen entwickelt.他说：“我不会把所有的钱都放在一张纸上。”在Diesen Membren bildet Synaxin Synaxin-ABHängie Mikrodonänen中，die sich von rafts unterscheiden and die Andock-und Fusionsstellen für sekretorische Granula finieren.我是在这里为您服务的。从4PI到Mikroskopie auflöSong der 4PI-Mikroskopie auflöSong der 4PI，Um den Abstand von sekretorischen Vesikeln zu den Synaxin-Mikrodonänen MIT einer Genauigkeit von 10-20 nm zu bstimen and um diesen Abstand MIT funktionellen参数n zu korreleren。他说：“这是一件非常重要的事情，因为这是一件非常重要的事情。摘要：在神经元胞吐过程中，囊泡结合的SNARE Synaptobrevin 2与质膜结合的SNARs Synaxin 1A和SNAP-25形成复合体，启动融合反应。SNARE蛋白不仅相互形成复合体，它们还被报道为同源齐聚，并且它们具有大量的结合伙伴。为了研究完整膜中SNARs和SNARE相互作用蛋白的空间组织，我们最近建立了一种程序，从PC12细胞产生表面结合和内向外的质膜。这些膜片保持其调节胞吐作用的能力，并可被外部探针接触到。我们发现，合成素是在胆固醇依赖的微域中组织的，这些微域不同于洗涤剂耐受膜(RAFT)，并且定义了分泌颗粒的对接和融合位置。这里概述的研究计划有两个具体目标。首先，我们将利用先进的共聚焦显微镜(4PI显微镜)来确定颗粒到Synaxin簇的距离，精度为10-20 nm，并将距离与功能参数相关联。其次，我们将研究由SNARs和辅助蛋白重组的脂质体是否能够在这样的微域对接和融合。

Bei der neuronalen Exocytose bildet das vesikuläre SNARE-Protein Synaptobrevin-2 Komplexe mit den membranständigen SNAREs Syntaxin 1A und SNAP-25, wodurch die Fusionsreaktion eingeleitet wird. SNARE Proteine bilden nicht nur Komplexe untereinander, sondern sie bilden auch Homo-Oligomere, und außerdem sind zahlreiche weitere Bindungspartner bekannt. Um die räumliche Anordnung von SNAREs und SNARE-bindenden Proteinen zu untersuchen, haben wir ein Verfahren zur Herstellung von Plasmamembran-Rasen aus PC12-Zellen entwickelt. Diese Membran-Rasen behalten ihre Fähigkeit zur regulierten Exocytose, und sie sind für extern zugesetzte Reagenzien zugänglich. In diesen Membranen bildet Syntaxin Cholesterin-abhängige Mikrodomänen, die sich von Rafts unterscheiden und die Andock- und Fusionsstellen für sekretorische Granula definieren. Im hier vorgelegten Forschungsprojekt verfolgen wir zwei Ziele. Erstens soll die erhöhte Auflösung der 4Pi-Mikroskopie ausgenutzt werden, um den Abstand von sekretorischen Vesikeln zu den Syntaxin-Mikrodomänen mit einer Genauigkeit von 10-20 nm zu bestimmen und um diesen Abstand mit funktionellen Parametern zu korrelieren. Zweitens soll herausgefunden werden, ob Liposomen, die SNAREs sowie akzessorische Proteine enthalten, an solche Mikrodomänen binden und mit ihnen fusionieren können. Summary: During neuronal exocytosis, the vesicle-bound SNARE synaptobrevin 2 forms complexes with the plasma membrane-bound SNAREs syntaxin 1A and SNAP-25 to intiate the fusion reaction. SNARE proteins form complexes not only with each other, they also have been reported to homo-oligomerize, and they are known to have a multitude of binding partners. To study the spatial organisation of SNAREs and SNARE-interacting proteins in intact membranes we have recently established a procedure for the generation of surface-bound and inside-out sheets of plasma membranes from PC12 cells. These membrane sheets retain their capacity for regulated exocytosis and are accessible to external probes. We found that syntaxin is organised in cholesteroldependent microdomains that are distinct from detergent resistant membranes (rafts) and that define docking and fusion sites for secretory granules. The research program outlined here has two specific aims. First, we will exploit advanced confocal microscopy (4Pi microscopy) to determine the distance of docked granules to the syntaxin clusters with an accuracy of 10-20 nm and to correlate the distance with functional parameters. Second, we will investigate whether liposomes reconstituted with SNAREs and accessory proteins are capable of docking and fusion at such microdomains.