PROCESSING OF DENGUE VIRUS POLYPROTEIN NS3-NS4A-NS4B-NS5 DOMAIN

用于表达多蛋白NS 3的切割机制- 研究登革病毒的NS 4A-NS 4 B-NS 5结构域，目的是 阐明了这些登革病毒蛋白的功能活性。 为此目的，重组牛痘病毒v（NS 2B-NS 3-NS 4A-NS 4 B-NS 4A-NS 4 B）被构建成重组体。 NS5），v（NS3-NS4A-NS4B-NS5），v（NS4A-NS4B-NS5），和v（NS4B-NS5）。 构建了 这些重组体用于感染细胞， 用NS 3或NS 5特异性抗血清分析标记的裂解物。 我们 研究结果表明，NS 2B是处理 下游非结构蛋白。 在NS 2B存在下， 反式多蛋白NS 3-NS 4A-NS 4 B-NS 5在NS 3-NS 4A 尽管效率低于NS 4 B-NS 5结。 的 黄病毒NS 4A-NS 4 B切割连接遵循长的疏水连接。 顺序 多蛋白NS 4A-NS 4 B-NS 5片段在100 ℃下被适当切割。 在没有其他登革病毒功能的情况下的NS 4A-NS 4 B连接 如NS 1-NS 2A和NS 2B-NS 3蛋白酶系统。 然而，在这方面， v（NS 3-NS 4A-NS 4 B-NS 5）仅表达未切割的多蛋白前体。 因此，NS 3-NS 4A连接处的切割似乎是NS 3-NS 4A连接的先决条件。 在下游接合处发生分裂。 最后， 表达未切割的NS 4 B-NS 5多蛋白的重组体，例如 NS 3-NS 4A-NS 4 B-NS 5、NS 4A-NS 4 B-NS 5或NS 4 B-NS 5，经适当切割产生 当用于与v（NS 2B-NS 3 30%）或与v（NS 2B）+共感染时， v（NS3）. 这些结果表明，NS 4 B-NS 5连接处的切割 多蛋白的表达是由NS 2B和NS 3反式介导的。

The cleavage mechanism utilized for expression of the polyprotein NS3- NS4A-NS4B-NS5 domain of dengue virus was studied with the aim of elucidating the functional activities of these dengue virus proteins. For this purpose, recombinant vaccinia viruses v(NS2B-NS3-NS4A-NS4B- NS5), v(NS3-NS4A-NS4B-NS5), v(NS4A-NS4B-NS5), and v(NS4B-NS5) were constructed. These recombinants were used to infect cells and the labelled lysates were analyzed by NS3 or NS5 specific antiserum. Our findings indicated that NS2B is required for processing of the downstream nonstructural proteins. In the presence of NS2B supplied in trans, polyprotein NS3-NS4A-NS4B-NS5 was cleaved at the NS3-NS4A junction although less efficiently than at the NS4B-NS5 junction. The flavivirus NS4A-NS4B cleavage junction follows a long hydrophobic sequence. The polyprotein NS4A-NS4B-NS5 segment was properly cleaved at the NS4A-NS4B junction in the absence of other dengue viral functions such as the NS1-NS2A and NS2B-NS3 protease systems. However, v(NS3-NS4A-NS4B-NS5) expressed only the uncleaved polyprotein precursor. Thus, cleavage at the NS3-NS4A junction appears to be a prerequisite for cleavage at the downstream junction to take place. Finally, recombinants that expressed an uncleaved NS4B-NS5 polyprotein, such as NS3-NS4A-NS4B-NS5, NS4A-NS4B-NS5 or NS4B-NS5, produced properly cleaved NS5 when used for coinfection with v(NS2B-NS3 30%), or with v(NS2B) plus v(NS3). These results indicated that cleavage at the NS4B-NS5 junction of the polyprotein is mediated by NS2B and NS3 in trans.