LASER ABLATION OF GFP & ( TUBULIN LABELED CENTROSOMES IN SOMATIC CELLS

（由GMS R 01 40198向C. L.里德尔）我们最近 示范，？微管蛋白-GFP（？TGF β）融合蛋白特异性 标记并描绘中心体的边界， 活细胞使我们能够通过激光显微手术， 中心体在细胞周期的任何阶段。 正如我们已经 证明（下面的第一篇论文）的消失？TGF β信号 在激光操作过程中观察到的破坏对应于 中心体的辐射部分。 因此，可以消融 整个中心体的目标是所有的中心体相关的？TGFP 信号，或者只是它的一部分。这种新颖的方法提供了一种 令人兴奋和独特的机会，有选择地摧毁，第一， 时间，脊椎动物体细胞中的全部或部分中心体， 间期和有丝分裂。 我们目前的实验包括两个 主要的子项目第一个是阐明中心体在 纺锤体形成与维持 在脊椎动物体细胞的有丝分裂中。 为此，我们将使用 激光显微手术，专门破坏一个或两个 中心体在有丝分裂的各个阶段，从中前期到 后期 第二个是确定细胞是否启动和完成 DNA合成，和/或进行分裂，在破坏所有或只是 在细胞周期的不同时期的中心体的一部分。 这些 实验将揭示，如果没有中心体，或 在G1或G2中存在仅包含一个中心粒的中心体， 单个二倍体（即，G2中的母亲/女儿中心粒对）， 抑制脊椎动物细胞周期的正常进程 体细胞 Khodjakov，A.，R.W.科尔和C. L.里德尔。 （晚 1997年）。 技术的协同作用：将激光显微手术与 绿色荧光蛋白标记。 细胞运动和细胞骨架 38：311-317 Khodjakov，A and C. L.里德尔。 1998年：《协同增效》 技术：结合激光显微手术和绿色荧光 蛋白GFP）-标记。 SPIE国际生物医学研讨会 光学（BIOS'98）技术 ABS. Digest pp. 156. Khodjakov，A.，R.W. 科尔和C. L.里德尔。 1998年：激光破坏一个中心体 在前期的显微手术下调了第二个的活性， 中心体并抑制纺锤体形成。 Molecular Biology of the 单元格（印刷中）

(Supported by GMS R01 40198 to C. L. Rieder) Our recent demonstration that ?-tubulin-GFP (?TGFP) fusion protein specifically labels and delineates the boundaries of the centrosome within in the living cell allows us to reproducibly destroy, by laser microsurgery, the centrosome at any stage of the cell cycle. As we have already demonstrated (first paper below) the disappearance of ?TGFP signal observed during the laser operation corresponds to destruction of the irradiated part of the centrosome. As a result, one can ablate the entire centrosome by targeting all of the centrosome-associated ?TGFP signal, or just a part of it. This novel approach provides an exciting and unique opportunity to selectively destroy, for the first time, all or part of the centrosome in vertebrate somatic cells during interphase and mitosis. Our current line of experiments includes two major sub-projects The first is to clarify the role the centrosome in spindle formation and maint enance during mitosis in vertebrate somatic cells. To do this we will use laser microsurgery to specifically destroy one or both of the centrosomes at various stages of mitosis, from mid-prophase through anaphase. The second is to determine if cells initiate and complete DNA synthesis, and/or undergo division, after destroying all or just part of the centrosome during different periods of cell cycle. These experiments will reveal if the absence of a centrosome, or the presence of a centrosome containing just one centriole in G1 or a single diplosome (i.e., a mother/daughter centriole pair) in G2, inhibits normal progression through the cell cycle in vertebrate somatic cells. Khodjakov, A., R.W. Cole and C. L. Rieder. (late 1997). A synergy of technologies: combining laser microsurgery with green fluorescent protein tagging. Cell Motility and the Cytoskeleton 38:311-317 Khodjakov, A and C. L. Rieder. (1998) A synergy of technologies: Combining laser microsurgery with green fluorescent protein GFP)-tagging. SPIE International Symposium on Biomedical Optics (BIOS'98) Tech. Abs. Digest pp. 156. Khodjakov, A., R.W. Cole and C. L. Rieder. (1998) Destruction of one centrosome by laser microsurgery during prophase down-regulates the activity of the second centrosome and inhibits spindle formation. Molecular Biology of the Cell (in press)