以壳聚糖为载体的屋尘螨低变应原性DNA黏膜疫苗的构建及鼻腔免疫效果研究

本项目以本土屋尘螨的Der p 1组分为目的基因构建了以壳聚糖为载体的DNA疫苗，对其转染率、理化性质的稳定性，及通过粘膜免疫途径预防性给予后对变应性炎症发生发展的作用进行了实验探索和分析。在成功构建了真核表达质粒pVAX1-Der p 1的基础上，通过转染细胞及免疫荧光试验验证了pVAX1-Der p 1能成功转染293T细胞并表达D er p 1蛋白。以壳聚糖为载体，复凝聚法制备pVAX1-Der p1/CS纳米粒，发现其具有良好的DNA包封率且能有效地抑制核酸酶对质粒DNA的降解。对pVAX1-Der p1/CS纳米粒预防性干预变应性炎症的研究表明，pVAX1- Der p 1/CS纳米颗粒通过鼻腔黏膜给药方式能拮抗变应性鼻炎动物模型外周血中IL-4、sIgE水平的增高，及IFN—γ的减弱。而泛素化真核表达质粒pVAX1-ubi－Der p 1的作用更显著，在通过鼻腔黏膜途径预防性的给予后，变应性鼻炎动物模型外周血中IL-4、IL-17、sIgE水平降低，IFN—γ、sIgG水平升高。本研究首次验证了pVAX1-Der p1/CS纳米粒经鼻腔给药后能同时在局部及系统水平调节变应性炎症，而利用鼻粘膜免疫途径、壳聚糖载体及泛素化设计是加强DNA疫苗的有效手段。