PD-1/PD-L1拮抗肽的筛选及其在肿瘤免疫治疗中的应用研究

PD-1/PD-L1作为T细胞活化过程中一对重要的负性共刺激分子，在诱导T细胞无能和免疫耐受维持方面有重要作用，并与肿瘤免疫耐受和逃逸相关，是肿瘤免疫治疗的明星靶点。本项目首先运用基因工程的方法获得PD-1/PD-L1的重组表达载体pET28a-hPD-L1、pET15b–hPD-L1 IgV和pET28a-hPD-1，并获得高纯的靶标蛋白。通过噬菌体展示肽库的高通量筛选方法，获得了一系列针对PD-1和PD-L1的拮抗肽，利用酶联免疫吸附测试(ELISA)和表面等离子共振技术（SPR）分析拮抗肽与PD-1和PD-L1的亲和力，并选择高亲和力的P1肽进行结构优化改造。细胞增殖MTT实验证明筛选的拮抗肽不能直接影响肿瘤细胞的生长。通过流式分析了解不同肿瘤细胞PD-L1的表达情况，并挑选高表达PD-L1的肿瘤细胞B16和CT26建立相应的小鼠移植瘤模型，对拮抗肽进行体内活性分析，结果证明拮抗肽P1在降低肿瘤生长和延长小鼠生存期方面显示出较好的抗肿瘤活性。本研究为PD-1和 PD-L1作为肿瘤免疫治疗药物开发提供了理论基础。