Purification of properties of rabbit liver estrone and p-nitrophenol UDP-glucuronyltransferases.
Purification of properties of rabbit liver estrone and p-nitrophenol UDP-glucuronyltransferases.
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兔肝雌酮和对硝基苯酚 UDP-葡萄糖醛酸转移酶特性的纯化。
DOI：
10.1016/0003-9861(81)90314-3
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发表时间：
1981
影响因子：
3.9
通讯作者：
Tephly,TR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Tukey,RH;Tephly,TR
本文用DEAE-纤维素柱层析和UDP-己醇胺Sepharose-4 B亲和柱层析从兔肝微粒体中分离纯化了雌酮和对硝基酚UDP-葡萄糖醛酸转移酶。两种酶制剂的亚基分子量均为57，000。雌酮和对硝基苯酚UDP-葡萄糖醛酸转移酶似乎以四聚体形式存在，通过凝胶色谱法测定的表观分子量为230，000。雌酮UDP-葡萄糖醛酸转移酶是完全无活性的，除非在磷脂酰胆碱的存在下进行测定。在磷脂的情况下，可以检测到的可降解的-硝基苯酚UDP-葡萄糖醛酸转移酶的酶活性，然而，在磷脂的存在下发生的比活性增加了四倍。雌酮UDP-葡萄糖醛酸转移酶不能催化对硝基苯酚的葡萄糖醛酸化，而对硝基苯酚UDP-葡萄糖醛酸转移酶对雌酮显示轻微的活性。这些酶的特性表明，雌酮和对硝基苯酚UDP-葡萄糖醛酸转移酶是明显不同的蛋白质。这两种酶表现出电荷异质性聚丙烯酰胺等电聚焦，雌酮和对硝基苯酚UDP-葡萄糖醛酸转移酶表现出的等电点分别为7.6和6.8。氨基酸分析表明，雌酮尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶含有60%的疏水氨基酸，而对硝基酚尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶含有53%的疏水氨基酸。在十二烷基硫酸钠存在下的有限蛋白水解导致各自转移酶的肽图组成存在明显差异。此外，每种酶表现出不同的最佳pH值的最大催化活性的表达。
Estrone andp-nitrophenol UDP-glucuronyltransferases from rabbit liver microsomes have been separated and purified to homogeneity by DEAE-cellulose chromatography and affinity chromatography on UDP-hexanolamine Sepharose-4B. Both enzyme preparations exhibited subunit molecular weights of 57,000. Estrone andp-nitrophenol UDP-glucuronyltransferases appear to exist as tetramers with an apparent molecular weight of 230,000 as determined by gel chromatography. Estrone UDP-glucuronyltransferase was completely inactive unless assayed in the presence of phosphatidylcholine. In the absence of phospholipid, considerablep-nitrophenol UDP-glucuronyltransferase enzyme activity could be detected; however, a fourfold increase in specific activity occurred in the presence of phospholipid. Estrone UDP-glucuronyltransferase could not catalyze the glucuronidation ofp-nitrophenol, whereas thep-nitrophenol UDP-glucuronyltransferase displayed slight activity toward estrone. Characterization of these enzymes revealed that estrone andp-nitrophenol UDP-glucuronyltransferases are clearly different proteins. Both enzymes demonstrated charge heterogeneity on polyacrylamide isoelectric focusing, with estrone andp-nitrophenol UDP-glucuronyltransferases exhibiting isoelectric points of 7.6 and 6.8, respectively. Amino acid analysis of the purified enzymes demonstrated that estrone UDP-glucuronyltransferase contained 60% hydrophobic amino acids whilep-nitrophenol UDP-glucuronyltransferase contained 53% hydrophobic amino acids. Limited proteolysis in the presence of sodium dodecyl sulfate resulted in clear differences in the peptide map composition of the respective transferase. Also, each enzyme exhibited a different pH optima for the expression of maximal catalytic activity.
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