Fluorescent-protein stabilization and high-resolution imaging of cleared, intact mouse brains.
Fluorescent-protein stabilization and high-resolution imaging of cleared, intact mouse brains.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0124650
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Giese G
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schwarz MK;Scherbarth A;Sprengel R;Engelhardt J;Theer P;Giese G
为了通过光学显微镜观察和量化完整小鼠大脑中的长距离神经元连接，首先需要清理大脑，从而抑制折射率的变化。在这里，我们描述了一种使用 pH 值调整的非水性指数匹配介质来清理大脑并保留蛋白质荧光团信号的方法。通过在脱水过程中使用 1-丙醇或叔丁醇，同时保持碱性 pH 值，可以实现成功的澄清。我们证明，即使在透明溶液中放置数月后，也可以在亚细胞分辨率下对整个、结构完整的幼年和成年小鼠大脑进行高分辨率荧光成像。我们还表明，使用特制的光片荧光显微镜可以对整个大脑中由改良狂犬病病毒标记的 EGFP 轴突长程投影进行成像。为了证明该技术的可行性，我们确定了外侧内嗅皮质中目标细胞群的单突触投影的详细图。这个例子表明，我们的方法允许在未切割大脑的亚细胞水平上量化全脑连接模式。
In order to observe and quantify long-range neuronal connections in intact mouse brain by light microscopy, it is first necessary to clear the brain, thus suppressing refractive-index variations. Here we describe a method that clears the brain and preserves the signal from proteinaceous fluorophores using a pH-adjusted non-aqueous index-matching medium. Successful clearing is enabled through the use of either 1-propanol or tert-butanol during dehydration whilst maintaining a basic pH. We show that high-resolution fluorescence imaging of entire, structurally intact juvenile and adult mouse brains is possible at subcellular resolution, even following many months in clearing solution. We also show that axonal long-range projections that are EGFP-labelled by modified Rabies virus can be imaged throughout the brain using a purpose-built light-sheet fluorescence microscope. To demonstrate the viability of the technique, we determined a detailed map of the monosynaptic projections onto a target cell population in the lateral entorhinal cortex. This example demonstrates that our method permits the quantification of whole-brain connectivity patterns at the subcellular level in the uncut brain.
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DOI：
10.1093/bioinformatics/btp184
发表时间：
2009-06-01
期刊：
Bioinformatics (Oxford, England)
影响因子：
--
作者：
Preibisch S;Saalfeld S;Tomancak P
通讯作者：
Tomancak P
DOI：
10.1073/pnas.1218991110
发表时间：
2013-03-19
影响因子：
11.1
作者：
Deshpande, Aditi;Bergami, Matteo;Berninger, Benedikt
通讯作者：
Berninger, Benedikt
影响因子：
2.9
作者：
Enoki, S;Saeki, K;Kuwajima, K
通讯作者：
Kuwajima, K
影响因子：
3.4
作者：
Oberto, Alessandra;Acquadro, Elena;Eva, Carola
通讯作者：
Eva, Carola
影响因子：
64.8
作者：
通讯作者：
--