Directed genomic integration in Actinobacillus actinomycetemcomitans: generation of defined leukotoxin-negative mutants.
Directed genomic integration in Actinobacillus actinomycetemcomitans: generation of defined leukotoxin-negative mutants.
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伴放线放线杆菌中的定向基因组整合：产生确定的白细胞毒素阴性突变体。
DOI：
10.1128/iai.63.7.2780-2784.1995
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发表时间：
1995
影响因子：
3.1
通讯作者：
Kraig,E
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kolodrubetz,D;Phillips,LH;Ezzo,PJ;Kraig,E
为了开发牙周病原体伴放线放线杆菌中的靶向基因整合，将含有白细胞毒素基因片段的基于ColE1的壮观霉素抗性质粒电穿孔到菌株JP 2中。在产生的所有稳定的壮观霉素抗性转化体中，质粒已经重组到基因组白细胞毒素基因座中，因为基于ColE1的载体不能在A.伴放线菌然后，通过用含有白细胞毒素基因的内部片段的基于ColE1的质粒转化白细胞毒素产生菌株JP 2，使用定向基因组整合来构建白细胞毒素阴性菌株。细胞毒性试验证明，这些转化子具有< 0.1%的亲本菌株的白细胞毒素活性。这些结果表明，基于整合的方法可以用于产生在特定的毒力基因在A。伴放线菌
To develop targeted gene integration in the periodontal pathogen Actinobacillus actinomycetemcomitans, a ColE1-based, spectinomycin-resistant plasmid containing a segment of the leukotoxin gene was electroporated into strain JP2. In all of the stable spectinomycin-resistant transformants that arose, the plasmid had recombined into the genomic leukotoxin locus since ColE1-based vectors cannot replicate extrachromosomally in A. actinomycetemcomitans. Directed genomic integration was then used to construct a leukotoxin-negative strain by transforming the leukotoxin-producing strain JP2 with a ColE1-based plasmid containing an internal fragment of the leukotoxin gene. Cytotoxicity assays proved that these transformants had < 0.1% of the leukotoxin activity of the parental strain. These results demonstrate that integration-based approaches can be used for generating isogenic mutants in specific virulence genes in A. actinomycetemcomitans.
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通过整合 DNA 转化对酵母肌动蛋白基因进行致命破坏。
DOI：
10.1126/science.7046050
发表时间：
1982
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Shortle,D;Haber,JE;Botstein,D
通讯作者：
Botstein,D
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影响因子：
--
作者：
Kolodrubetz,D;Kraig,E
通讯作者：
Kraig,E
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影响因子：
3.2
作者：
B. Mollet;J. Knol;B. Poolman;Olivier Marciset;MICHkLE DELLEY1
通讯作者：
MICHkLE DELLEY1
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影响因子：
3.1
作者：
C. Tsai;W. McArthur;P. Baehni;B. F. Hammond;N. Taichman
通讯作者：
N. Taichman
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影响因子：
14.9
作者：
Guthmiller,JM;Kolodrubetz,D;Cagle,MP;Kraig,E
通讯作者：
Kraig,E