Cloning of cDNA to a yeast viral double-stranded RNA and comparison of three viral RNAs.
Cloning of cDNA to a yeast viral double-stranded RNA and comparison of three viral RNAs.
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将 cDNA 克隆到酵母病毒双链 RNA 并比较三种病毒 RNA。
DOI：
10.1016/0378-1119(82)90010-5
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发表时间：
1982
期刊：
影响因子：
3.5
通讯作者：
Gross,KW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bobek,LA;Bruenn,JA;Field,LJ;Gross,KW
我们构建了含有小的互补DNA （cDNA）序列的重组DNA克隆，该序列与4.8 kb的酵母病毒双链RNA (dsRNA) （L1）部分同源，该RNA编码病毒衣壳多肽。病毒dsRNA及其体外转录物均未发生聚腺苷化；因此，以剪断的鲑鱼精子DNA作为随机引物，利用逆转录酶在病毒转录酶制备的体外mRNA转录物上合成cdna。这是首次报道克隆同源于病毒双链RNA的cDNA。这种方法对于dsRNA病毒应该是通用的，因为所有的dsRNA病毒都有衣壳相关的转录酶活性。重叠cDNA插入片段的长度在100 ~ 800 bp之间。其中约40%映射到体外转录本的5'端，这些已被排序。至少有1485 bp的l1末端存在于所鉴定的克隆cdna中。利用克隆的cdna作为探针，我们发现两种病毒亚型的L dsRNAs在转录起始位点相似，而在其他地方不同。
We have constructed recombinant DNA clones containing small complementary DNA (cDNA) sequences homologous to portions of a 4.8-kb yeast viral double-stranded RNA (dsRNA) (L1) that codes for the viral capsid polypeptide. Neither the viral dsRNA nor its in vitro transcript is polyadenylated; hence the cDNAs were synthesized by reverse transcriptase on the in vitro mRNA transcript made by the viral transcriptase, using sheared salmon sperm DNA as a random primer. This is the first reported cloning of cDNA homologous to a viral double-stranded RNA. This method should be of general utility for dsRNA viruses, since all have a capsid-associated transcriptase activity. The lengths of the overlapping cDNA inserts varied from 100 to 800 bp. About 40% of them mapped to the 5' end of the in vitro transcript, and these have been ordered. At least 1485 bp of this end of L1is represented in the cloned cDNAs characterized. Using the cloned cDNAs as probes, we have shown that the L dsRNAs of two viral subtypes are similar at the transcription initiation site and dissimilar elsewhere.
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