Purification of human β- and γ-actin from budding yeast.
Purification of human β- and γ-actin from budding yeast.
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DOI：
10.1242/jcs.260540
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发表时间：
2023-05-01
影响因子：
4
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中科院分区：
文献类型：
--
作者：
人肌动蛋白及其结合伙伴的生化研究很大程度上依赖于骨骼肌中丰富且易于纯化的α-肌动蛋白。因此，肌动蛋白已被用于评估和确定大多数肌动蛋白调节蛋白的活性，但存在一个潜在的担忧，即这些蛋白的表现与非肌肉细胞中的肌动蛋白不同。为了提供易于获取且相对丰富的人β-或γ-肌动蛋白（即细胞质肌动蛋白）来源，我们开发了酿酒酵母菌株，将这两种蛋白作为其唯一的肌动蛋白来源。该系统纯化的β-或γ-肌动蛋白均可聚合并与多种结合伙伴相互作用，包括profilin、mDia1 （formin）、fascin和胸腺素-β4 （t -β4）。值得注意的是，与α-肌动蛋白相比，t - β4和profilin与β-或γ-肌动蛋白结合的亲和力更高，这强调了用特定的肌动蛋白同工型检测肌动蛋白配体的价值。这些试剂将使肌动蛋白的特异性异构体更容易获得，为未来的肌动蛋白调控研究提供依据。摘要：从出芽酵母中提取人β-和γ-肌动蛋白是研究特定肌动蛋白异构体调控的一种方便且低成本的方法。
Biochemical studies of human actin and its binding partners rely heavily on abundant and easily purified α-actin from skeletal muscle. Therefore, muscle actin has been used to evaluate and determine the activities of most actin regulatory proteins but there is an underlying concern that these proteins perform differently from actin present in non-muscle cells. To provide easily accessible and relatively abundant sources of human β- or γ-actin (i.e. cytoplasmic actins), we developed Saccharomyces cerevisiae strains that express each as their sole source of actin. Both β- or γ-actin purified in this system polymerize and interact with various binding partners, including profilin, mDia1 (formin), fascin and thymosin-β4 (Tβ4). Notably, Tβ4 and profilin bind to β- or γ-actin with higher affinity than to α-actin, emphasizing the value of testing actin ligands with specific actin isoforms. These reagents will make specific isoforms of actin more accessible for future studies on actin regulation. Summary: Generation and characterization of human β- and γ-actin from budding yeast as an accessible and low-cost way to study the regulation of specific actin isoforms.
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