Expression and In Vivo Loading of De Novo Proteins with Tetrapyrrole Cofactors.
Expression and In Vivo Loading of De Novo Proteins with Tetrapyrrole Cofactors.
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使用四吡咯辅因子表达和体内装载 De Novo 蛋白质。
DOI：
10.1007/978-1-0716-1826-4_8
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Curnow P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Curnow P
四吡咯辅因子，如血红素和叶绿素的印记，其固有的反应性和性质上的许多天然蛋白质和酶，并有很大的兴趣，利用其功能和催化能力在最小的，从头设计的蛋白质支架。在这里，我们描述了如何，只使用天然的生物合成和翻译后修饰途径，从头设计的可溶性和疏水性蛋白质可以配备tetraphyrrole辅因子在livingEscherichia colicells。我们提供的策略，以实现共价和非共价血红素掺入从头蛋白质，并描述如何血红素生物合成途径可以增选生产光敏锌原卟啉IX装载到蛋白质在体内。此外，我们描述了成像的疏水蛋白和辅因子丰富的蛋白液滴的电子和荧光显微镜，以及如何辅因子可以剥离从头蛋白质，以帮助在体外鉴定。
Tetrapyrrole cofactors such as heme and chlorophyll imprint their intrinsic reactivity and properties on a multitude of natural proteins and enzymes, and there is much interest in exploiting their functional and catalytic capabilities within minimal, de novo designed protein scaffolds. Here we describe how, using only natural biosynthetic and post-translational modification pathways, de novo designed soluble and hydrophobic proteins can be equipped with tetrapyrrole cofactors within livingEscherichia colicells. We provide strategies to achieve covalent and non-covalent heme incorporation within the de novo proteins and describe how the heme biosynthetic pathway can be co-opted to produce the light sensitive zinc protoporphyrin IX for loading into proteins in vivo. In addition, we describe the imaging of hydrophobic proteins and cofactor-rich protein droplets by electron and fluorescence microscopy, and how cofactors can be stripped from the de novo proteins to aid in vitro identification.
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--
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Watkins DW
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