Labeling live cells by copper-catalyzed alkyne--azide click chemistry.
Labeling live cells by copper-catalyzed alkyne--azide click chemistry.
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DOI：
10.1021/bc100272z
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发表时间：
2010-10-20
影响因子：
4.7
通讯作者：
Finn, M. G.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hong, Vu;Steinmetz, Nicole F.;Manchester, Marianne;Finn, M. G.
铜催化的叠氮化物 - 炔烃环加成（CuAAC）反应经过针对水性缓冲液中的生物分子进行优化后，已被证明能够快速标记培养中的哺乳动物细胞，且细胞活力没有损失。由贝托齐（Bertozzi）开发的N - 乙酰甘露糖胺叠氮衍生物通过代谢摄取并在细胞表面展示，随后使用抗坏血酸钠和配体三（羟丙基三唑基）甲胺（THPTA）进行CuAAC连接，使得染料 - 炔烃反应物大量共价连接。THPTA既能加速CuAAC反应，又能保护细胞免受由抗坏血酸对铜催化的氧气还原所产生的氧化剂的损伤，而这种氧气还原是使金属保持在活性的 +1氧化态所必需的。这一过程将这种基于叠氮化物的最快的生物正交反应的应用扩展到了活细胞的外部。
The copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) reaction, optimized for biological molecules in aqueous buffers, has been shown to rapidly label mammalian cells in culture with no loss in cell viability. Metabolic uptake and display of the azide derivative of N-acetylmannosamine developed by Bertozzi, followed by CuAAC ligation using sodium ascorbate and the ligand tris(hydroxypropyltriazolyl)methylamine (THPTA), gave rise to abundant covalent attachment of dye-alkyne reactants. THPTA serves both to accelerate the CuAAC reaction and to protect the cells from damage by oxidative agents produced by the Cu-catalyzed reduction of oxygen by ascorbate, which is required to maintain the metal in the active +1 oxidation state. This procedure extends the application of this fastest of azide-based bioorthogonal reactions to the exterior of living cells.
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