Improved methods for marking active neuron populations.
Improved methods for marking active neuron populations.
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DOI：
10.1038/s41467-018-06935-2
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发表时间：
2018-10-25
影响因子：
16.6
通讯作者：
Schreiter ER
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Moeyaert B;Holt G;Madangopal R;Perez-Alvarez A;Fearey BC;Trojanowski NF;Ledderose J;Zolnik TA;Das A;Patel D;Brown TA;Sachdev RNS;Eickholt BJ;Larkum ME;Turrigiano GG;Dana H;Gee CE;Oertner TG;Hope BT;Schreiter ER
用高时空分辨率标记功能不同的神经元集合是系统神经科学中的一个关键挑战。我们最近推出了Campari，这是一种工程荧光蛋白，其从绿色到红色的光转换依赖于同时的光暴露和钙的升高，这使得能够以单细胞和亚秒的分辨率标记活跃的神经元群体。然而，Campari(CaMPARI1)有一些缺点，包括低钙条件下的本底光转化，动力学速度慢，化学固定后荧光减弱。在这项工作中，我们开发了CaMPARI2，这是一种改进的传感器，具有更明亮的绿色和红色荧光，更快的钙解离动力学，并在低钙条件下降低光转化。我们证明了CaMPARI2在哺乳动物神经元中以及在斑马鱼幼体大脑和小鼠视皮层中的改善表现。此外，我们在此开发了一种免疫组织化学检测方法，用于光转化的红色形式的Campari的特定标记。抗Campari-red抗体提供了对啮齿动物脑组织中激活的神经元中光转化Campari具有选择性的强标记。目前尚缺乏直接标记活性神经元的方法。在这里，作者开发了CaMPARI2，一种用于神经元活动的光可转换荧光蛋白传感器，具有改进的亮度和钙结合动力学，以及一种抗体，用于在固定样本中放大激活的传感器信号。
Marking functionally distinct neuronal ensembles with high spatiotemporal resolution is a key challenge in systems neuroscience. We recently introduced CaMPARI, an engineered fluorescent protein whose green-to-red photoconversion depends on simultaneous light exposure and elevated calcium, which enabled marking active neuronal populations with single-cell and subsecond resolution. However, CaMPARI (CaMPARI1) has several drawbacks, including background photoconversion in low calcium, slow kinetics and reduced fluorescence after chemical fixation. In this work, we develop CaMPARI2, an improved sensor with brighter green and red fluorescence, faster calcium unbinding kinetics and decreased photoconversion in low calcium conditions. We demonstrate the improved performance of CaMPARI2 in mammalian neurons and in vivo in larval zebrafish brain and mouse visual cortex. Additionally, we herein develop an immunohistochemical detection method for specific labeling of the photoconverted red form of CaMPARI. The anti-CaMPARI-red antibody provides strong labeling that is selective for photoconverted CaMPARI in activated neurons in rodent brain tissue. Methods to directly label active neurons are still lacking. Here the authors develop CaMPARI2, a photoconvertible fluorescent protein sensor for neuronal activity with improved brightness and calcium binding kinetics, as well as an antibody to amplify the activated sensor signal in fixed samples.
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影响因子：
16.2
作者：
Denny CA;Kheirbek MA;Alba EL;Tanaka KF;Brachman RA;Laughman KB;Tomm NK;Turi GF;Losonczy A;Hen R
通讯作者：
Hen R
DOI：
10.1523/jneurosci.4502-12.2013
发表时间：
2013-05-15
期刊：
The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience
影响因子：
--
作者：
Lambo ME;Turrigiano GG
通讯作者：
Turrigiano GG
平铺 3D 显微图像采集的全局最佳拼接。
DOI：
10.1093/bioinformatics/btp184
发表时间：
2009-06-01
期刊：
Bioinformatics (Oxford, England)
影响因子：
--
作者：
Preibisch S;Saalfeld S;Tomancak P
通讯作者：
Tomancak P
影响因子：
25
作者：
Maffei, A;Nelson, SB;Turrigiano, GG
通讯作者：
Turrigiano, GG
影响因子：
5.3
作者：
Nahmani, Marc;Turrigiano, Gina G.
通讯作者：
Turrigiano, Gina G.