A single-vesicle content mixing assay for SNARE-mediated membrane fusion.
A single-vesicle content mixing assay for SNARE-mediated membrane fusion.
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DOI：
10.1038/ncomms1054
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发表时间：
2010-08-10
影响因子：
16.6
通讯作者：
Ha, Taekjip
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Diao, Jiajie;Su, Zengliu;Ishitsuka, Yuji;Lu, Bin;Lee, Kyung Suk;Lai, Ying;Shin, Yeon-Kyun;Ha, Taekjip
由可溶性 N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体 (SNARE) 介导的膜融合的体外研究主要是通过脂质混合进行的。然而，由于脂蛋白体的渗漏、囊泡聚集和破裂，融合孔的形成及其扩张很难直接检测，这往往使整体融合实验的解释变得复杂。熔孔扩张是熔合机械完全塌陷熔合和回收的重要步骤。在这里，我们演示了一种在单分子和囊泡水平上检测大货物的囊泡间混合的方法。当封装在表面束缚囊泡中的 DNA 发夹遇到来自另一个囊泡的互补 DNA 链时，FRET 信号的变化表明内容混合。我们发现，单独的酵母 SNARE 复合体在没有任何辅助蛋白的情况下可以将融合孔扩大到足以传输约 11 kD 的货物。
The in vitro studies of membrane fusion mediated by soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors (SNAREs) have primarily been performed by following the mixing of the lipids. However, the formation a of fusion pore and its expansion has been difficult to detect directly due to the leakiness of proteoliposomes, vesicle aggregation and rupture that often complicate the interpretation of ensemble fusion experiments. Fusion pore expansion is an essential step for full collapse fusion and recycling of the fusion machineries. Here, we demonstrate a method to detect the inter-vesicular mixing of large cargoes at the single molecule and vesicle level. The change in FRET signal when a DNA hairpin encapsulated in a surface-tethered vesicle encounters a complementary DNA strand from another vesicle indicates content mixing. We found that that the yeast SNARE complex alone without any accessory proteins can expand the fusion pore large enough to transmit ~ 11 kD cargoes.
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影响因子：
16.8
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1083/jcb.200203135
发表时间：
2002-07-22
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Mahal LK;Sequeira SM;Gureasko JM;Söllner TH
通讯作者：
Söllner TH
影响因子：
3.4
作者：
Dennison, SM;Bowen, ME;Lentz, BR
通讯作者：
Lentz, BR
DOI：
10.1073/pnas.0401779101
发表时间：
2004-05-11
影响因子：
11.1
作者：
Fix, M;Melia, TJ;Simon, SM
通讯作者：
Simon, SM
DOI：
10.1073/pnas.2036428100
发表时间：
2003-12-09
影响因子：
11.1
作者：
Weninger, K;Bowen, ME;Brunger, AT
通讯作者：
Brunger, AT