Multicolor protein FRET with tryptophan, selective coumarin-cysteine labeling, and genetic acridonylalanine encoding.
Multicolor protein FRET with tryptophan, selective coumarin-cysteine labeling, and genetic acridonylalanine encoding.
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DOI：
10.1039/c7cc05492k
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发表时间：
2017-10-05
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Petersson EJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ferrie JJ;Ieda N;Haney CM;Walters CR;Sungwienwong I;Yoon J;Petersson EJ
位点特异性荧光探针可用于测量蛋白质内的距离，作为Förster共振能量转移（FRET）对的一部分。在这里，我们报告的合成香豆素马来酰亚胺（Mcm-Mal）是荧光与半胱氨酸反应后。我们证明，半胱氨酸，acridonylalanine（Acd）双突变蛋白可以产生非天然氨基酸诱变和反应与Mcm-Mal产生的Mcm/Acd标记的蛋白质的FRET研究。Mcm/Acd FRET对干扰最小，易于安装，非常适合研究15-40 nm范围内的蛋白质距离。此外，Mcm/Acd标记可以与色氨酸荧光在三色FRET中组合，以在一个实验中监测多种相互作用。
Site-specific fluorescence probes can be used to measure distances within proteins when used as part of a Förster resonance energy transfer (FRET) pair. Here we report the synthesis of a coumarin maleimide (Mcm-Mal) that is fluorogenic upon reaction with cysteine. We demonstrate that cysteine, acridonylalanine (Acd) double mutant proteins can be produced by unnatural amino acid mutagenesis and reacted with Mcm-Mal to generate Mcm/Acd labeled proteins for FRET studies. The Mcm/Acd FRET pair is minimally-perturbing, easy to install, and well-suited to studying protein distances in the 15-40 Å range. Furthermore, Mcm/Acd labeling can be combined with tryptophan fluorescence in three color FRET to monitor multiple interactions in one experiment.
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DOI：
10.1002/cphc.201402661
发表时间：
2015-01-12
期刊：
Chemphyschem : a European journal of chemical physics and physical chemistry
影响因子：
--
作者：
Moosa MM;Ferreon AC;Deniz AA
通讯作者：
Deniz AA
影响因子：
3.9
作者：
Wu, Gang;Berta, Vladimir;Tsai, Ah-Lim
通讯作者：
Tsai, Ah-Lim
影响因子：
56.9
作者：
LIU, MY;CHEN, TY;YAU, KW
通讯作者：
YAU, KW
影响因子：
2.9
作者：
Wang, AJ;Bolen, DW
通讯作者：
Bolen, DW
影响因子：
15
作者：
Anthis, Nicholas J.;Doucleff, Michaeleen;Clore, G. Marius
通讯作者：
Clore, G. Marius