Avidity-Based Method for the Efficient Generation of Monoubiquitinated Recombinant Proteins.
Avidity-Based Method for the Efficient Generation of Monoubiquitinated Recombinant Proteins.
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基于亲和力的方法，用于有效地产生单泛素化的重组蛋白。
DOI：
10.1021/jacs.3c01943
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发表时间：
2023-04-12
影响因子：
15
通讯作者：
Deshmukh L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nelson SL;Li Y;Chen Y;Deshmukh L
蛋白质的单泛素化控制着不同的生理过程，其失调与多种病理学有关。制备足够材料的困难常常使单泛素化重组蛋白的生物物理研究复杂化。在这里，我们描述了一个强大的基于亲和力的方法，克服了这个问题。作为概念验证，我们使用NEDD 4家族E3连接酶产生毫克量的两种单泛素化靶点，帕金森蛋白α-突触核蛋白和ESCRT蛋白阿利克斯。通过定量化学蛋白质组学鉴定单泛素化热点。使用FRAP和染料结合试验，我们发现monoubiquitination对这两种淀粉样蛋白的相分离和纤维化性质的显著相反的影响，反映了它们分子间相互作用的差异，从而提供了独特的见解monoubiquitination对蛋白质聚集的影响。
Monoubiquitination of proteins governs diverse physiological processes, and its dysregulation is implicated in multiple pathologies. The difficulty of preparing sufficient material often complicates the biophysical studies of monoubiquitinated recombinant proteins. Here we describe a robust avidity-based method that overcomes this problem. As a proof-of-concept, we produced milligram quantities of two monoubiquitinated targets, Parkinson’s protein α-synuclein and ESCRT-protein ALIX, using NEDD4-family E3 ligases. Monoubiquitination hotspots were identified by quantitative chemical proteomics. Using FRAP and dye-binding assays, we uncovered strikingly opposite effects of monoubiquitination on the phase separation and fibrillization properties of these two amyloidogenic proteins, reflecting differences in their intermolecular interactions, thereby providing unique insights into the impact of monoubiquitination on protein aggregation.
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影响因子：
44.1
作者：
Swatek KN;Komander D
通讯作者：
Komander D
DOI：
10.1042/bj20151195
发表时间：
2016-05-15
期刊：
The Biochemical journal
影响因子：
--
作者：
Stanley M;Virdee S
通讯作者：
Virdee S
DOI：
10.1111/gtc.12250
发表时间：
2015-07
期刊：
Genes to cells : devoted to molecular & cellular mechanisms
影响因子：
--
作者：
Nakagawa T;Nakayama K
通讯作者：
Nakayama K
影响因子：
16.6
作者：
Hejjaoui, Mirva;Haj-Yahya, Mahmood;Lashuel, Hilal A.
通讯作者：
Lashuel, Hilal A.
DOI：
10.1016/j.jbc.2021.101328
发表时间：
2021-11
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Elias RD;Ramaraju B;Deshmukh L
通讯作者：
Deshmukh L