Protocols for SARS-CoV-2 infection in primary ocular cells and eye organoids.
Protocols for SARS-CoV-2 infection in primary ocular cells and eye organoids.
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DOI：
10.1016/j.xpro.2022.101383
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发表时间：
2022-06-17
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Blenkinsop, Timothy A.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Eriksen, Anne Zebitz;Moller, Rasmus;Makovoz, Bar;tenOever, Benjamin R.;Blenkinsop, Timothy A.
在这里，我们描述了一系列方案，详细说明了在人眼模型中评估SARS-CoV-2感染的步骤。包括全眼类器官分化、SARS-CoV-2感染和处理类器官进行单细胞RNA测序的方案。其他方案描述了如何解剖和培养来自尸体供体眼睛的成人眼细胞，以及如何使用qPCR、免疫荧光和斑块测定来比较SARS-CoV-2感染和SARS-CoV-2进入因子的存在。有关使用和执行本协议的完整详情，请参阅。鉴定供体眼细胞中SARS-CoV-2的进入因子揭示整个眼类器官中易受SARS-CoV-2感染的细胞类型眼部细胞中SARS-CoV-2感染潜力的测定方案实现了供体细胞和hesc来源的类器官感染的比较这里，我们描述了一系列方案，详细介绍了在人眼模型中评估SARS-CoV-2感染的步骤。包括全眼类器官分化、SARS-CoV-2感染和处理类器官进行单细胞RNA测序的方案。其他方案描述了如何解剖和培养来自尸体供体眼睛的成人眼细胞，以及如何使用qPCR、免疫荧光和斑块测定来比较SARS-CoV-2感染和SARS-CoV-2进入因子的存在。
Here, we describe a series of protocols detailing the steps for evaluating SARS-CoV-2 infection in models of the human eye. Included are protocols for whole eye organoid differentiation, SARS-CoV-2 infection, and processing organoids for single-cell RNA sequencing. Additional protocols describe how to dissect and culture adult human ocular cells from cadaver donor eyes and how to compare infection of SARS-CoV-2 and the presence of SARS-CoV-2 entry factors using qPCR, immunofluorescence, and plaque assays. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to. Identification of SARS-CoV-2 entry factors in cultured donor eye cells Revealing cell types vulnerable to SARS-CoV-2 infection in whole eye organoid Determination on of infection potential of SARS-CoV-2 in ocular cells Protocol enables comparison of infection in donor cells and hESC-derived organoids Here, we describe a series of protocols detailing the steps for evaluating SARS-CoV-2 infection in models of the human eye. Included are protocols for whole eye organoid differentiation, SARS-CoV-2 infection, and processing organoids for single-cell RNA sequencing. Additional protocols describe how to dissect and culture adult human ocular cells from cadaver donor eyes and how to compare infection of SARS-CoV-2 and the presence of SARS-CoV-2 entry factors using qPCR, immunofluorescence, and plaque assays.
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