Induction of an immortalized songbird cell line allows for gene characterization and knockout by CRISPR-Cas9.
Induction of an immortalized songbird cell line allows for gene characterization and knockout by CRISPR-Cas9.
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DOI：
10.1038/s41598-022-07434-7
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发表时间：
2022-03-14
影响因子：
4.6
通讯作者：
Jarvis ED
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Biegler MT;Fedrigo O;Collier P;Mountcastle J;Haase B;Tilgner HU;Jarvis ED
斑胸草雀是生物学中最常被研究的鸣禽之一，特别是在基因组学，神经科学和声音交流方面。然而，该物种缺乏用于分子生物学研究和试剂优化的稳健细胞系。我们产生了一个细胞系，命名为CFS414，从斑胸草雀胚胎成纤维细胞使用SV40大，小T抗原。该细胞系通过连续和密度非依赖性生长证明了对先前鸣禽细胞系的改进，允许无限期培养和单克隆系衍生。细胞遗传学、基因组学和转录组学分析确定了该细胞系的来源，并确定了与正在进行的鸣禽研究相关的基因表达。使用该细胞系，我们使用金黄色葡萄球菌Cas9破坏内源基因序列，并证实了歌曲系统特异性基因SAP30L的应激依赖性定位反应。CFS414细胞的实用性增强了斑胸草雀的综合分子潜力，并验证了鸣禽物种中的细胞永生化策略。
The zebra finch is one of the most commonly studied songbirds in biology, particularly in genomics, neuroscience and vocal communication. However, this species lacks a robust cell line for molecular biology research and reagent optimization. We generated a cell line, designated CFS414, from zebra finch embryonic fibroblasts using the SV40 large and small T antigens. This cell line demonstrates an improvement over previous songbird cell lines through continuous and density-independent growth, allowing for indefinite culture and monoclonal line derivation. Cytogenetic, genomic, and transcriptomic profiling established the provenance of this cell line and identified the expression of genes relevant to ongoing songbird research. Using this cell line, we disrupted endogenous gene sequences using S.aureus Cas9 and confirmed a stress-dependent localization response of a song system specialized gene, SAP30L. The utility of CFS414 cells enhances the comprehensive molecular potential of the zebra finch and validates cell immortalization strategies in a songbird species.
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