Repurposing CRISPR as an RNA-guided platform for sequence-specific control of gene expression.
Repurposing CRISPR as an RNA-guided platform for sequence-specific control of gene expression.
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DOI：
10.1016/j.cell.2013.02.022
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发表时间：
2013-02-28
期刊：
影响因子：
64.5
通讯作者：
Lim WA
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Qi LS;Larson MH;Gilbert LA;Doudna JA;Weissman JS;Arkin AP;Lim WA
在全基因组范围内的靶向基因调控是询问、干扰和工程化细胞系统的有力策略。在这里，我们开发了一种基于Cas9控制基因表达的方法，Cas9是一种来自II型CRISPR系统的RNA引导的DNA内切酶。我们表明，当与指导RNA共表达时，缺乏内切核酸酶活性的催化死亡的Cas9产生DNA识别复合物，该复合物可以特异性地干扰转录延伸、RNA聚合酶结合或转录因子结合。这种系统，我们称之为CRISPR干扰（CRISPRi），可以有效地抑制大肠杆菌中靶基因的表达，而没有可检测到的脱靶效应。CRISPRi可用于同时抑制多个靶基因，其作用是可逆的。我们还表明，该系统可以适应哺乳动物细胞中的基因抑制的证据。这种RNA引导的DNA识别平台提供了一种在全基因组范围内选择性干扰基因表达的简单方法。
Targeted gene regulation on a genome-wide scale is a powerful strategy for interrogating, perturbing, and engineering cellular systems. Here, we develop a method for controlling gene expression based on Cas9, an RNA-guided DNA endonuclease from a type II CRISPR system. We show that a catalytically dead Cas9 lacking endonuclease activity, when coexpressed with a guide RNA, generates a DNA recognition complex that can specifically interfere with transcriptional elongation, RNA polymerase binding, or transcription factor binding. This system, which we call CRISPR interference (CRISPRi), can efficiently repress expression of targeted genes in Escherichia coli, with no detectable off-target effects. CRISPRi can be used to repress multiple target genes simultaneously, and its effects are reversible. We also show evidence that the system can be adapted for gene repression in mammalian cells. This RNA-guided DNA recognition platform provides a simple approach for selectively perturbing gene expression on a genome-wide scale.
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DOI：
10.1038/nrg2749
发表时间：
2010-03
期刊：
Nature reviews. Genetics
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
64.5
作者：
Zamore, PD;Tuschl, T;Bartel, DP
通讯作者：
Bartel, DP
影响因子：
46.9
作者：
Pédelacq, JD;Cabantous, S;Waldo, GS
通讯作者：
Waldo, GS