Growth kinetics and validation of near‐physiologically synchronized HEK293S Cultures
Growth kinetics and validation of near‐physiologically synchronized HEK293S Cultures
复制标题
近生理同步 HEK293S 培养物的生长动力学和验证
DOI：
10.1002/elsc.201400224
复制
发表时间：
2015
影响因子：
2.7
通讯作者：
A. E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Castillo;A. E.
为了研究细胞培养物中的细胞周期特异性过程，可以应用同步方法，特别是当单细胞分析不适用时。彻底的验证是必不可少的，以尽量减少同步过程中引入的失真，并获得有效的数据，这往往是被忽视的。在本研究中，首次使用逆流离心淘洗法在人生产细胞系（HEK 293 S）上进行了同步化并进行了验证。获得了两个主要部分，与非同步化状态下的约16%相比，第一部分中G2/M细胞的量减少至约15%，并且在第二部分中富集至约30%。对于这些细胞的非凡敏感性，我们要特别小心。基于DNA含量、生长行为、细胞大小分布以及消耗和生产速率来验证正确性和同步化程度。细胞周期分布、有效生长速率和特征细胞直径在100 h内一致振荡。为了便于分析，一个新的和简单的方法来估计细胞周期的位置介绍和验证。它表明，在18-24小时的恢复时间后，所有相关特性都恢复到非同步培养的状态。这表明细胞周期特异性分析仅在同步化后约18-24小时开始有效。
For investigation of cell cycle‐specific processes in cell cultures, synchronization methods can be applied, especially when single‐cell analytics are not applicable. Thorough validation is essential to minimize distortions introduced by the synchronization procedure and to derive valid data, which is often neglected. In this study, synchronization has been performed and validated for the first time on a human producer cell line (HEK293S) using counterflow centrifugal elutriation. Two main fractions were obtained, with the amount of G2/M cells reduced to ∼5% in the first fraction, compared to ∼16% in the non‐synchronized state, and enriched to ∼30% in the second fraction. Special care was taken with respect to the extraordinary sensitivity of these cells. Validation of correctness and degree of synchronization were based on DNA content, growth behavior, cell size distribution and consumption and production rates. The resulting cell cycle distributions, effective growth rates, and characteristic cell diameter oscillated concertedly for up to 100 h. To facilitate analysis, a new and simple approach to estimate the cell cycle position is introduced and validated. It shows that after a recovery time of 18–24 h, all relevant properties return to the state of non‐synchronized cultures. This indicates that cell cycle specific analysis can only be valid starting from approximately 18–24 h after synchronization.
登录
查看更多内容
DNA 含量和绿色荧光蛋白表达分析
影响因子：
--
作者：
I. Schmid;K. Sakamoto
通讯作者：
K. Sakamoto
影响因子：
--
作者：
Platas Barradas O;Jandt U;Hass R;Kasper C;Sandig V;Pörtner R;Zeng AP
通讯作者：
Zeng AP
标准化摇匀以同步培养的 CHO 细胞。
DOI：
--
发表时间：
1983
期刊：
Mutation research
影响因子：
--
作者：
T. Zwanenburg
通讯作者：
T. Zwanenburg
影响因子：
--
作者：
Zhou X;Kerkhof M;Span L;Friedrich A;Arends J
通讯作者：
Arends J
影响因子：
23.9
作者：
Warren, Luigi;Manos, Philip D.;Ahfeldt, Tim;Loh, Yuin-Han;Li, Hu;Lau, Frank;Ebina, Wataru;Mandal, Pankaj K.;Smith, Zachary D.;Meissner, Alexander;Daley, George Q.;Brack, Andrew S.;Collins, James J.;Cowan, Chad;Schlaeger, Thorsten M.;Rossi, Derrick J.
通讯作者：
Rossi, Derrick J.