Protocol for cross-platform characterization of human and murine extracellular vesicles and particles.
Protocol for cross-platform characterization of human and murine extracellular vesicles and particles.
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DOI：
10.1016/j.xpro.2023.102754
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发表时间：
2024-03-15
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Hoshino, Ayuko
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bojmar, Linda;Kim, Han Sang;Sugiura, Kei;Heissel, Soren;Lucotti, Serena;Cioffi, Michele;Johnson, Kofi Ennu;Cohen-Gould, Leona;Zhang, Haiying;Molina, Henrik;Matei, Irina R.;Lyden, David;Hoshino, Ayuko
分离的细胞外囊泡和颗粒 (EVP) 的表征对于确定功能和生物标志物潜力至关重要。在这里，我们提出了一个协议来分析大小、数量、形态和 EVP 蛋白货物，并验证人类和小鼠中的 EVP 蛋白。我们描述了纳米颗粒跟踪分析、透射电子显微镜、单 EVP 免疫检测、EVP 蛋白质组质谱和生物信息学分析以及通过 ExoELISA 和蛋白质印迹分析进行 EVP 蛋白验证的步骤。这允许 EVP 跨不同平台进行交叉验证。有关该协议的使用和执行的完整详细信息，请参阅 Hoshino 等人。跨不同平台对分离的 EVP 进行交叉验证 使用纳米颗粒跟踪分析和透射电子显微镜 LC-MS/MS 进行 EVP 评估以及随后的生物信息学分析以识别 EVP 蛋白货物 通过单颗粒分析、蛋白质印迹和 exoELISA 验证 EVP 蛋白 出版商说明：进行任何实验方案都需要遵守当地实验室安全和道德机构指南。分离的细胞外囊泡和颗粒 (EVP) 的表征对于确定功能和生物标志物潜力至关重要。在这里，我们提出了一个协议来分析大小、数量、形态和 EVP 蛋白货物，并验证人类和小鼠中的 EVP 蛋白。我们描述了纳米颗粒跟踪分析、透射电子显微镜、单 EVP 免疫检测、EVP 蛋白质组质谱和生物信息学分析以及通过 exoELISA 和蛋白质印迹分析进行 EVP 蛋白质验证的步骤。这允许 EVP 跨不同平台进行交叉验证。
Characterization of isolated extracellular vesicles and particles (EVPs) is crucial for determining functions and biomarker potential. Here, we present a protocol to analyze size, number, morphology, and EVP protein cargo and to validate EVP proteins in both humans and mice. We describe steps for nanoparticle tracking analysis, transmission electron microscopy, single-EVP immunodetection, EVP proteomic mass spectrometry and bioinformatic analysis, and EVP protein validation by ExoELISA and western blot analysis. This allows for EVP cross-validation across different platforms. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Hoshino et al. Cross-validation of isolated EVPs across different platforms EVP evaluation using nanoparticle tracking analysis and transmission electron microscopy LC-MS/MS and subsequent bioinformatic analysis for EVP protein cargo identification Validation of EVP proteins by single-particle analysis, western blot, and exoELISA Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. Characterization of isolated extracellular vesicles and particles (EVPs) is crucial for determining functions and biomarker potential. Here, we present a protocol to analyze size, number, morphology, and EVP protein cargo and to validate EVP proteins in both humans and mice. We describe steps for nanoparticle tracking analysis, transmission electron microscopy, single-EVP immunodetection, EVP proteomic mass spectrometry and bioinformatic analysis, and EVP protein validation by exoELISA and western blot analysis. This allows for EVP cross-validation across different platforms.
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影响因子：
56.9
作者：
Golub, TR;Slonim, DK;Lander, ES
通讯作者：
Lander, ES
影响因子：
14.8
作者：
Rappsilber, Juri;Mann, Matthias;Ishihama, Yasushi
通讯作者：
Ishihama, Yasushi
影响因子：
48
作者：
Wisniewski, Jacek R.;Zougman, Alexandre;Mann, Matthias
通讯作者：
Mann, Matthias
影响因子：
14.8
作者：
van der Vlist, Els J.;Nolte-'t Hoen, Esther N. M.;Wauben, Marca H. M.
通讯作者：
Wauben, Marca H. M.
影响因子：
5.4
作者：
Dragovic, Rebecca A.;Gardiner, Christopher;Brooks, Alexandra S.;Tannetta, Dionne S.;Ferguson, David J. P.;Hole, Patrick;Carr, Bob;Redman, Christopher W. G.;Harris, Adrian L.;Dobson, Peter J.;Harrison, Paul;Sargent, Ian L.
通讯作者：
Sargent, Ian L.