Deconvolution-free Subcellular Imaging with Axially Swept Light Sheet Microscopy.
Deconvolution-free Subcellular Imaging with Axially Swept Light Sheet Microscopy.
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DOI：
10.1016/j.bpj.2015.05.013
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发表时间：
2015-06-16
影响因子：
3.4
通讯作者：
Fiolka, Reto
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dean, Kevin M.;Roudot, Philippe;Welf, Erik S.;Danuser, Gaudenz;Fiolka, Reto
传输不变贝塞尔光束的使用使高分辨率亚细胞薄片荧光显微镜成为可能。然而，贝塞尔光束同心旁瓣结构内的能量随着传输长度的增加而显著增加，从而产生不需要的散焦荧光，这对成像视场大小施加了实际限制。在这里，我们提出了一种光片荧光显微镜，它在大视场范围内实现了390 nm的各向同性分辨率和高光学切片强度(即，离焦模糊被强烈抑制)，不需要结构照明或基于去卷积的后处理。我们展示了在复杂的三维微环境中迁移细胞的同步双色、高对比度和高动态范围的时移成像，对笼状蛋白涂层凹坑的三维跟踪，以及跨越>；10小时和涵盖>；2600个时间点的长期成像。
The use of propagation invariant Bessel beams has enabled high-resolution subcellular light sheet fluorescence microscopy. However, the energy within the concentric side lobe structure of Bessel beams increases significantly with propagation length, generating unwanted out-of-focus fluorescence that enforces practical limits on the imaging field of view size. Here, we present a light sheet fluorescence microscope that achieves 390 nm isotropic resolution and high optical sectioning strength (i.e., out-of-focus blur is strongly suppressed) over large field of views, without the need for structured illumination or deconvolution-based postprocessing. We demonstrate simultaneous dual-color, high-contrast, and high-dynamic-range time-lapse imaging of migrating cells in complex three-dimensional microenvironments, three-dimensional tracking of clathrin-coated pits, and long-term imaging spanning >10 h and encompassing >2600 time points.
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