Distinct Substrate Specificity and Catalytic Activity of the Pseudoglycosyltransferase VldE.
Distinct Substrate Specificity and Catalytic Activity of the Pseudoglycosyltransferase VldE.
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DOI：
10.1016/j.chembiol.2015.04.021
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发表时间：
2015-06-18
影响因子：
--
通讯作者：
Mahmud T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Abuelizz HA;Mahmud T
假糖基转移酶（PsGT）VldE是一种类似于海藻糖6-磷酸合酶（OtsA）的糖基转移酶样蛋白。然而，与催化UDP-葡萄糖和葡萄糖6-磷酸之间的缩合的OtsA相反，VldE偶联两个假糖以得到具有α，α-N-假糖苷键的产物。尽管它们在天然产物生物合成中具有独特的催化活性和重要作用，但对其底物特异性和催化作用的分子基础知之甚少。在这里，我们报告比较生化和动力学研究使用重组OtsA，VldE，和他们的嵌合蛋白与各种糖和假糖底物。我们发现，嵌合酶可以产生杂合假（氨基）二糖和受体中的氨基是必要的，以促进与假糖供体的偶联反应。此外，我们还发现酶的N端结构域不仅在选择受体中起主要作用，而且还控制供体的核苷酸二磷酸部分的类型。
The pseudoglycosyltransferase (PsGT) VldE is a glycosyltransferase-like protein that is similar to trehalose 6-phosphate synthase (OtsA). However, in contrast to OtsA, which catalyzes condensation between UDP-glucose and glucose 6-phosphate, VldE couples two pseudosugars to give a product with an α,α-N-pseudoglycosidic linkage. Despite their unique catalytic activity and important role in natural products biosynthesis, little is known about the molecular basis governing their substrate specificity and catalysis. Here, we report comparative biochemical and kinetic studies using recombinant OtsA, VldE, and their chimeric proteins with a variety of sugar and pseudosugar substrates. We found that the chimeric enzymes can produce hybrid pseudo-(amino)disaccharides and an amino group in the acceptor is necessary to facilitate a coupling reaction with a pseudosugar donor. Furthermore, we found that the N-terminal domains of the enzymes not only play a major role in selecting the acceptors, but also control the type of nucleotidyl diphosphate moiety of the donors.
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