Identification of selenoprotein O substrates using a biotinylated ATP analog.
Identification of selenoprotein O substrates using a biotinylated ATP analog.
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DOI：
10.1016/bs.mie.2021.10.001
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发表时间：
2022
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作者：
硒蛋白O（Selenoprotein O）是25种人类硒蛋白之一，含有第21位氨基酸硒代半胱氨酸。最近的研究揭示了一个以前没有记录的氧化还原调节机制，硒保护细胞免受氧化损伤。SelO催化AMP从ATP到蛋白质底物的羟基侧链的共价加成，这是一种称为AMP化的翻译后修饰。虽然AMP化在50多年前就被发现了，但检测和富集底物的方法是有限的。在这里，我们描述的协议克隆，纯化，并确定使用生物素化ATP类似物的细菌SelO的基板。SelO底物的鉴定和AMP化的功能后果将阐明这种进化上保守的硒蛋白的意义。
Selenoprotein O is one of 25 human selenoproteins that incorporate the 21st amino acid selenocysteine. Recent studies have revealed a previously undocumented mechanism of redox regulation by which SelO protects cells from oxidative damage. SelO catalyzes the covalent addition of AMP from ATP to the hydroxyl side chain of protein substrates in a post translational modification known as AMPylation. Although AMPylation was discovered over 50 years ago, methods to detect and enrich substrates are limited. Here, we describe protocols to clone, purify, and identify the substrates of bacterial SelO using a biotinylated ATP analog. Identification of SelO substrates and the functional consequences of AMPylation will illuminate the significance of this evolutionarily conserved selenoprotein.
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