Self-guanylylation of birnavirus VP1 does not require an intact polymerase activity site.
Self-guanylylation of birnavirus VP1 does not require an intact polymerase activity site.
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DOI：
10.1016/j.virol.2009.09.004
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发表时间：
2009-12-05
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Tao, Yizhi Jane
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pan, Junhua;Lin, Li;Tao, Yizhi Jane
蛋白质启动是许多病毒用来启动基因组DNA或RNA合成的重要机制。Birna病毒是唯一一种使用蛋白质启动的双链(DS)RNA病毒。病毒编码的伯纳病毒VP1既具有聚合酶功能，又具有蛋白质引物的功能，并且能够通过自身的鸟苷酰化获得共价连接的RGMP。通过使用重组蛋白的生化分析，我们已经证明VP1的自我鸟酰化不需要RNA模板，而是依赖于二价金属离子。VP1与所有四种类型的rNTP都有反应，但强烈偏好rGTP。出乎意料的是，两个致命的聚合酶突变体D402a和E421Y，每个都有一个重要的催化残基突变，不能催化RNA合成，在自我鸟苷酸作用中保持活跃。鸟苷酰化位点进一步被定位到VP1N-末端结构域。我们的结果支持一种机制，即VP1的自身鸟酰化是由一个不同于聚合酶活性中心的新的活性中心催化的。
Protein-priming is an important mechanism that many viruses use to initiate genomic DNA or RNA synthesis. Birnaviruses are the only double-stranded (ds) RNA viruses that use protein priming. The viral-encoded VP1 of birnavirus functions as both a polymerase and a protein primer, and is able to undergo self-guanylylation to acquire a covalently linked rGMP. By employing biochemical assays using recombinant proteins, we have shown that VP1 self-guanylylation does not require an RNA template but is dependent on divalent metal ions. VP1 reacts with all four types of rNTPs but strongly prefers rGTP. Unexpectedly, two fatal polymerase mutants D402A and E421Y, each having an essential catalytic residue mutated and unable to catalyze RNA synthesis, remain active in self-guanylylation. The guanylylation site was further mapped to the VP1 N-terminal domain. Our results support a mechanism in which VP1 self-guanylylation is catalyzed by a novel active site different from the polymerase active site.
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