Micro-RNA-181a regulates osteopontin-dependent metastatic function in hepatocellular cancer cell lines.
Micro-RNA-181a regulates osteopontin-dependent metastatic function in hepatocellular cancer cell lines.
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DOI：
10.1016/j.surg.2010.05.007
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发表时间：
2010-08
期刊：
影响因子：
3.8
通讯作者：
Kuo PC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bhattacharya SD;Garrison J;Guo H;Mi Z;Markovic J;Kim VM;Kuo PC
OPN 是一种可变表达的分泌型糖磷蛋白，可介导肝细胞癌 (HCC) 的生长和转移。 MicroRNA (miRNA) 可能负责变异 OPN 表达，通过结合 OPN 信使 RNA (mRNA) 3'-非翻译区 (UTR) 来中断翻译。微阵列分析确定了感兴趣的 microRNA。将具有可变 OPN 3'UTR 突变的质粒荧光素酶报告基因构建体转染到两种 HCC 细胞系中，以确定 OPN 表达的 miRNA 调节。蛋白质印迹证实两种细胞系中都有不同的 OPN 表达。侵袭、粘附和迁移评估了具有修饰的 microRNA 和 OPN 表达的 Hep G2 和 Hep 3B 的转移行为。与 Hep G2 相比，Hep 3B 产生 36 倍的 microRNA 181a。转染 miRNA 181a 前体后，两种细胞系中的荧光素酶活性均降低 (p<0.01)；在两种细胞系中转染 miRNA 181a 抑制剂后，荧光素酶活性均增加 (p<0.01)。转染突变 OPN 3'UTR 的 Hep 3B 荧光素酶活性增加 108% (p<0.01)。在蛋白质印迹中，转染 miRNA 前体的 Hep G2 降低 OPN 表达 5 倍（p<0.01）。在蛋白质印迹中，用 miRNA 前体转染 Hep 3B 使 OPN 表达增加 3 倍（p<0.01）。转染 siOPN 和/或 miRNA 181a 抑制剂后，Hep 3B 系的体外转移相关性增加 (p<0.01)。 miRNA 181a 降低 HCC 细胞系中的 OPN 表达。这种未描述的机制可能赋予 HCC 转移特征。
OPN is a variably expressed secreted glycophosphoprotein that mediates hepatocellular cancer (HCC) growth and metastasis. MicroRNAs (miRNAs) may be responsible for variant OPN expression, interrupting translation by binding OPN messenger RNA (mRNA) 3′-untranslated regions (UTRs). Microarray analysis identified microRNAs of interest. Plasmid luciferase reporter constructs with variable OPN 3′UTR mutations were transfected into two HCC cell lines to determine miRNA regulation of OPN expression. Western blot confirmed variable OPN expression in both cell lines. Invasion, adhesion, and migration evaluated metastatic behavior in Hep G2 and Hep 3B with modified microRNA and OPN expression. Hep 3B produces 36x microRNA 181a compared to Hep G2. Luciferase activity after transfection with miRNA 181a precursor was decreased in both cell lines (p<0.01); luciferase activity increased with miRNA 181a inhibitor transfection in both cell lines (p<0.01). Hep 3B transfected with mutated OPN 3′UTR increased luciferase activity 108% (p<0.01). Hep G2 transfected with miRNA precursor decreased OPN expression 5x (p<0.01) in Western blot. Hep 3B transfection with miRNA precursor increased OPN expression 3x (p<0.01) in Western blot. In vitro metastatic correlates increased in Hep 3B lines after transfection with siOPN and/or miRNA 181a inhibitor (p<0.01). MiRNA 181a decreases OPN expression in HCC cell lines. This undescribed mechanism may confer metastatic characteristics to HCC.
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