Inactivation of a human kinetochore by specific targeting of chromatin modifiers.
Inactivation of a human kinetochore by specific targeting of chromatin modifiers.
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DOI：
10.1016/j.devcel.2008.02.001
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发表时间：
2008-04
影响因子：
11.8
通讯作者：
Masumoto, Hiroshi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nakano, Megumi;Cardinale, Stefano;Noskov, Vladimir N.;Gassmann, Reto;Vagnarelli, Paola;Kandels-Lewis, Stefanie;Larionov, Vladimir;Earnshaw, William C.;Masumoto, Hiroshi
我们已经使用了人类人工染色体（HAC）来操纵染色质在活性动粒内的表观遗传状态。HAC有一个二聚体α-卫星重复序列，包含一个具有CENP-B结合位点的天然单体和一个完全人工合成的单体，其中CENP-B盒被四环素操纵基因（tetO）取代。该HAC表现出正常的动粒蛋白组成和有丝分裂稳定性。靶向几个tet-阻遏物（tetR）融合到着丝粒对动粒功能没有影响。然而，改变染色质状态，以一个更开放的配置与tTA转录激活或一个更封闭的状态与tTS转录沉默引起的HAC的错误分离和损失。tTS结合导致CENP-A、CENP-B、CENP-C和H3 K4 me 2从着丝粒丢失，伴随着组蛋白H3 K9 me 3的积累。我们的研究结果表明，着丝粒染色质和异染色质之间的动态平衡是必不可少的脊椎动物动粒活动。
We have used a human artificial chromosome (HAC) to manipulate the epigenetic state of chromatin within an active kinetochore. The HAC has a dimeric α-satellite repeat containing one natural monomer with a CENP-B binding site, and one completely artificial synthetic monomer with the CENP-B box replaced by a tetracycline operator (tetO). This HAC exhibits normal kinetochore protein composition and mitotic stability. Targeting of several tet-repressor (tetR) fusions into the centromere had no effect on kinetochore function. However, altering the chromatin state to a more open configuration with the tTA transcriptional activator or to a more closed state with the tTS transcription silencer caused missegregation and loss of the HAC. tTS binding caused the loss of CENP-A, CENP-B, CENP-C, and H3K4me2 from the centromere accompanied by an accumulation of histone H3K9me3. Our results reveal that a dynamic balance between centromeric chromatin and heterochromatin is essential for vertebrate kinetochore activity.
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