Application of pressurized solvents for ultrafast trypsin hydrolysis in proteomics: proteomics on the fly.
Application of pressurized solvents for ultrafast trypsin hydrolysis in proteomics: proteomics on the fly.
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DOI：
10.1021/pr7008077
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发表时间：
2008-08
影响因子：
4.4
通讯作者：
Smith, Richard D.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lopez-Ferrer, Daniel;Petritis, Konstantinos;Hixson, Kim K.;Heibeck, Tyler H.;Moore, Ronald J.;Belov, Mikhail E.;Camp, David G., II;Smith, Richard D.
展示了一种在高压下快速蛋白水解消化蛋白质的新方法，该方法使用 5 至 35 kpsi 范围内的压力循环技术，用于蛋白质组分析。在 60 秒内成功实现了单一蛋白质和复杂蛋白质混合物的溶液内消化，然后通过反相液相色谱-电喷雾电离离子阱-质谱进行分析。相对于传统的“过夜”样品制备方法，评估了鸟枪法中鉴定的希瓦氏菌肽和蛋白质数量的方法性能。新方法的优点包括大大简化样品处理、易于实施、样品之间无交叉污染以及成本效益。
A new method for rapid proteolytic digestion of proteins under high pressure that uses pressure cycling technology in the range of 5 to 35 kpsi was demonstrated for proteomic analysis. Successful in-solution digestions of single proteins and complex protein mixtures were achieved in 60 s and then analyzed by reversed phase liquid chromatography-electrospray ionization ion trap-mass spectrometry. Method performance in terms of the number of Shewanella oneidensis peptides and proteins identified in a shotgun approach was evaluated relative to a traditional “overnight” sample preparation method. Advantages of the new method include greatly simplified sample processing, easy implementation, no cross contamination among samples, and cost effectiveness.
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