Site-specific epitope insertion into recombinant proteins using the MAP tag system.
Site-specific epitope insertion into recombinant proteins using the MAP tag system.
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DOI：
10.1093/jb/mvaa054
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发表时间：
2020-10-01
影响因子：
2.7
通讯作者：
Arimori T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wakasa A;Kaneko MK;Kato Y;Takagi J;Arimori T
MAP 标签系统包含源自小鼠足足蛋白的 14 个残基肽及其高亲和力单克隆抗体 PMab-1。我们确定了与 MAP 标签肽复合的 PMab-1 的晶体结构，发现识别只需要 MAP 标签序列 N 端的 8 个残基，从而能够缩短标签长度而不损失对 PMab-1 的亲和力。此外，该结构表明 MAP 标签在与 PMab-1 结合时采用 U 形构象，这表明环插入的 MAP 标签将呈现与 PMab-1 结合兼容的构象。我们将 8 残基 MAP 标签插入各种蛋白质（包括纤连蛋白 III 型结构域和 G 蛋白偶联受体）的多个环区域中，并测试它们是否保持 PMab-1 反应性。尽管插入位置造成构象限制，但所有插入 MAP 的突变体在哺乳动物细胞中均以与未标记蛋白相当的水平良好表达。此外，即使对于将 MAP 标签插入结构受限的 β-发夹的突变体，PMab-1 的结合也完全保持，这表明 MAP 标签系统具有独特的功能，可以放置在蛋白质结构域中间的所需位置。我们的结果表明 MAP 标签系统在“位点特异性表位插入”应用中具有多种用途。
The MAP tag system comprises a 14-residue peptide derived from mouse podoplanin and its high-affinity monoclonal antibody PMab-1. We determined the crystal structure of PMab-1 complexed with the MAP tag peptide and found that the recognition required only the N-terminal 8 residues of MAP tag sequence, enabling the shortening of the tag length without losing the affinity for PMab-1. Furthermore, the structure illustrated that the MAP tag adopts a U-shaped conformation when bound by PMab-1, suggesting that loop-inserted MAP tag would assume conformation compatible with the PMab-1 binding. We inserted the 8-residue MAP tag into multiple loop regions in various proteins including fibronectin type III domain and G-protein-coupled receptors and tested if they maintain PMab-1 reactivity. Despite the conformational restraints forced by the insertion position, all MAP-inserted mutants were expressed well in mammalian cells at levels comparable to the non-tagged proteins. Furthermore, the binding by PMab-1 was fully maintained even for the mutant where MAP tag was inserted at a structurally restricted β-hairpin, indicating that the MAP tag system has unique feature that allows placement in the middle of protein domain at desired locations. Our results indicate the versatile utility of the MAP tag system in ‘site-specific epitope insertion’ application.
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DOI：
10.1107/s0907444910045749
发表时间：
2011-04
期刊：
Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography
影响因子：
--
作者：
Winn MD;Ballard CC;Cowtan KD;Dodson EJ;Emsley P;Evans PR;Keegan RM;Krissinel EB;Leslie AG;McCoy A;McNicholas SJ;Murshudov GN;Pannu NS;Potterton EA;Powell HR;Read RJ;Vagin A;Wilson KS
通讯作者：
Wilson KS
影响因子：
64.8
作者：
Koehl A;Hu H;Maeda S;Zhang Y;Qu Q;Paggi JM;Latorraca NR;Hilger D;Dawson R;Matile H;Schertler GFX;Granier S;Weis WI;Dror RO;Manglik A;Skiniotis G;Kobilka BK
通讯作者：
Kobilka BK
影响因子：
1.6
作者：
Fujii, Yuki;Kaneko, Mika;Takagi, Junichi
通讯作者：
Takagi, Junichi
影响因子：
5.7
作者：
Dutka, Przemyslaw;Mukherjee, Somnath;Kossiakoff, Anthony A.
通讯作者：
Kossiakoff, Anthony A.
DOI：
10.1089/mab.2015.0041
发表时间：
2015-12-01
影响因子：
--
作者：
Oki, Hiroharu;Honma, Ryusuke;Kato, Yukinari
通讯作者：
Kato, Yukinari