Fusion of GFP to the M.EcoKI DNA methyltransferase produces a new probe of Type I DNA restriction and modification enzymes.
Fusion of GFP to the M.EcoKI DNA methyltransferase produces a new probe of Type I DNA restriction and modification enzymes.
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DOI：
10.1016/j.bbrc.2010.06.069
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发表时间：
2010-07-23
影响因子：
3.1
通讯作者：
Dryden, David T. F.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen, Kai;Roberts, Gareth A.;Stephanou, Augoustinos S.;Cooper, Laurie P.;White, John H.;Dryden, David T. F.
关键词：
►成功地将绿色荧光蛋白与分枝杆菌EcoKI DNA甲基转移酶融合。►绿色荧光蛋白位于序列特异性亚基的C末端，不影响酶的活性。►FRET证实了M.EcoKI与DNADNA结合的结构模型。我们描述了增强型绿色荧光蛋白与I型DNA修饰甲基转移酶M.EcoKI的HsdS DNA序列特异性亚单位的C末端的融合。融合蛋白在体内表达良好，并与两个HsdM修饰亚基组装。融合蛋白的功能是序列特异性DNA甲基转移酶，保护DNA免受EcoKI限制性内切酶的消化。纯化的酶显示Förster共振能量转移到含有目标序列的荧光标记的DNA双链和荧光标记的OCR蛋白，这是一种与M.EcoKI酶结合的DNA模拟物。由能量转移实验确定的距离证实了M.EcoKI的结构模型。
► Successful fusion of GFP to M.EcoKI DNA methyltransferase. ► GFP located at C-terminal of sequence specificity subunit does not later enzyme activity. ► FRET confirms structural model of M.EcoKI bound to DNA. We describe the fusion of enhanced green fluorescent protein to the C-terminus of the HsdS DNA sequence-specificity subunit of the Type I DNA modification methyltransferase M.EcoKI. The fusion expresses well in vivo and assembles with the two HsdM modification subunits. The fusion protein functions as a sequence-specific DNA methyltransferase protecting DNA against digestion by the EcoKI restriction endonuclease. The purified enzyme shows Förster resonance energy transfer to fluorescently-labelled DNA duplexes containing the target sequence and to fluorescently-labelled ocr protein, a DNA mimic that binds to the M.EcoKI enzyme. Distances determined from the energy transfer experiments corroborate the structural model of M.EcoKI.
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影响因子：
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作者：
Atanasiu, C;Su, TJ;Dryden, DTF
通讯作者：
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