Location and magnetic relaxation properties of the stable tyrosine radical in photosystem II.
Location and magnetic relaxation properties of the stable tyrosine radical in photosystem II.
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光系统II中稳定酪氨酸自由基的位置和磁弛豫特性。
DOI：
10.1021/bi00429a028
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发表时间：
1989
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Brudvig,GW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Innes,JB;Brudvig,GW
材料与方法菠菜类囊体的制备采用Yocum等的方法，以暗适应的市售菠菜为材料。（1981），终止于pH 6.0、30%（v/v）乙二醇、20 mM MES、15 mM NaCl、1 mM EDTA缓冲液和1 mg/mL牛血清白蛋白。PSII膜通过Berthold等人的方法获得。（1981），并具有Beck et al.（1985年）。用Clark型O2电极测量O2释放，并且在加入250 μ M作为电子受体的2，5-二氯-对苯醌的情况下获得450和600 μ mol O2/（mg chl-h）之间的速率。将所有菠菜样品沉淀并重悬于pH 6.0、30%乙二醇、20 mM MES、15 mM NaCl、0.05% Triton TX-100缓冲液中，用于EPR实验。通过在室温下在冰上将PSII膜在pH8.0、0.8M Tris-HCl缓冲液中以0.5mg chl/mL温育30分钟来制备Tris-洗涤的PSII膜。将膜沉淀，然后再次用Tris缓冲液重悬，然后反复沉淀并重悬于pH 6.0、30%乙二醇、MES-NaOH、含有1
Materials and MethodsSpinach thylakoids were prepared from dark-adapted market spinach by the method of Yocum et al.(1981), ending in a pH 6.0, 30%(v/v) ethylene glycol, 20 mM MES, 15 mM NaCl, 1 mM EDTA buffer with 1 mg/mL bovine serum albumin. PSII membranes were obtained by the procedure of Berthold et al.(1981) with the modifications described by Beck et al.(1985). 02 evolution was measured with a Clark-type 02 electrode, and rates between 450 and 600^ mol of 02/(mg of chl-h) were obtained with 250/uM added 2, 5-dichloro-p-benzoquinone as an electron acceptor. All spinach samples were pelleted and resuspended in pH 6.0, 30% ethylene glycol, 20 mM MES, 15 mM NaCl, 0.05% Triton TX-100 buffer for use in the EPR experiments. All steps were per-formed in dim green light.Tris-washed PSII membranes were prepared by incubation of PSII membranes in pH 8.0, 0.8 M Tris-HCl buffer at 0.5 mg of chl/mL for 30 min on ice, in room light. Membranes were pelleted, then resuspended again with the Tris buffer, and then repeatedly pelleted and resuspended in pH 6.0, 30% ethylene glycol, MES-NaOH, NaCl buffer containing 1
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