Correlative light and immuno-electron microscopy of retinal tissue cryostat sections.
Correlative light and immuno-electron microscopy of retinal tissue cryostat sections.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0191048
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Futter CE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Burgoyne T;Lane A;Laughlin WE;Cheetham ME;Futter CE
相关光电子显微镜（CLEM）是一种强大的技术，可以将荧光显微镜（FM）图像中的特定大分子定位到相应的高分辨率电子显微镜（EM）图像上。现有的方法适用于有限的样品类型，并且在技术上具有挑战性。在这里，我们描述了利用流行的FM包埋溶液、最佳切割温度（OCT）化合物对低温恒温器切片进行CLEM和免疫电子显微镜（iEM）的新方法。利用这些方法，我们已经(i)通过FM和EM在视网膜组织的视网膜色素上皮（RPE）中发现了相同的吞噬体；（ii）在iPSC衍生的视杯中显示了视紫红质在光感受器外节盘状结构上的正确定位；（iii）在RPE中发现了过氧化物酶体和黑素体以及吞噬体之间的一种新的相互作用。这些数据表明，低温切片可以很容易地表征组织样本中的目标大分子定位，从而提供了许多传统方法的实质性改进，这些方法仅限于培养细胞。由于OCT包埋通常用于FM，这为通过高分辨率EM进一步分析现有样品提供了一种易于获取和可靠的方法。
Correlative light-electron microscopy (CLEM) is a powerful technique allowing localisation of specific macromolecules within fluorescence microscopy (FM) images to be mapped onto corresponding high-resolution electron microscopy (EM) images. Existing methods are applicable to limited sample types and are technically challenging. Here we describe novel methods to perform CLEM and immuno-electron microscopy (iEM) on cryostat sections utilising the popular FM embedding solution, optimal cutting temperature (OCT) compound. Utilising these approaches, we have (i) identified the same phagosomes by FM and EM in the retinal pigment epithelium (RPE) of retinal tissue (ii) shown the correct localisation of rhodopsin on photoreceptor outer segment disc like-structures in iPSC derived optic cups and (iii) identified a novel interaction between peroxisomes and melanosomes as well as phagosomes in the RPE. These data show that cryostat sections allow easy characterisation of target macromolecule localisation within tissue samples, thus providing a substantial improvement over many conventional methods that are limited to cultured cells. As OCT embedding is routinely used for FM this provides an easily accessible and robust method for further analysis of existing samples by high resolution EM.
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影响因子：
11.8
作者：
Eden ER;Sanchez-Heras E;Tsapara A;Sobota A;Levine TP;Futter CE
通讯作者：
Futter CE
DOI：
10.1016/0005-2760(93)90174-8
发表时间：
1993-09-29
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA
影响因子：
--
作者：
SINGH, I;LAZO, O;KREMSER, K
通讯作者：
KREMSER, K
DOI：
10.1073/pnas.1130432100
发表时间：
2003-05-27
影响因子：
11.1
作者：
Gibbs, D;Kitamoto, J;Williams, DS
通讯作者：
Williams, DS
影响因子：
4.8
作者：
Reyes-Reveles, Juan;Dhingra, Anuradha;Boesze-Battaglia, Kathleen
通讯作者：
Boesze-Battaglia, Kathleen
影响因子：
7.7
作者：
Pearring, Jillian N.;Spencer, William J.;Arshavsky, Vadim Y.
通讯作者：
Arshavsky, Vadim Y.