Efficiency Improvements and Discovery of New Substrates for a SARS-CoV-2 Main Protease FRET Assay.
Efficiency Improvements and Discovery of New Substrates for a SARS-CoV-2 Main Protease FRET Assay.
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DOI：
10.1177/24725552211020681
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发表时间：
2021-10
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Klein CD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dražić T;Kühl N;Leuthold MM;Behnam MAM;Klein CD
由SARS-CoV-2病毒引起的COVID-19大流行对世界产生了巨大影响。虽然最近有几种疫苗已进入市场，但开发针对SARS-CoV-2的特异性抗病毒药物是抗击这一大流行病的重要补充战略。最有前途的药理学靶点之一是病毒主要蛋白酶（Mpro）。在这里，我们提出了一个优化的生化检测SARS-CoV-2 Mpro的程序。我们全面研究了不同缓冲液组分和条件对测定性能的影响，并表征了Förster共振能量转移（FRET）底物，其中优先选择2-Abz/Tyr（3-NO2）FRET对。底物2-AbzSAVLQSGTyr（3-NO2）R-OH（已建立的DABCYL/EDANS FRET底物的截短形式）和2-AbzVVTLQSGTyr（3-NO2）R-OH是用于筛选和抑制剂表征的有希望的候选物。在后一种底物中，在P5位掺入瓦尔提高了催化效率。基于所获得的结果，我们在这里提出了一个可重复的，可靠的测定方案，使用高度负担得起的缓冲液成分。
The COVID-19 pandemic, caused by the SARS-CoV-2 virus, has a huge impact on the world. Although several vaccines have recently reached the market, the development of specific antiviral drugs against SARS-CoV-2 is an important additional strategy in fighting the pandemic. One of the most promising pharmacological targets is the viral main protease (Mpro). Here, we present an optimized biochemical assay procedure for SARS-CoV-2 Mpro. We have comprehensively investigated the influence of different buffer components and conditions on the assay performance and characterized Förster resonance energy transfer (FRET) substrates with a preference for 2-Abz/Tyr(3-NO2) FRET pairs. The substrates 2-AbzSAVLQSGTyr(3-NO2)R-OH, a truncated version of the established DABCYL/EDANS FRET substrate, and 2-AbzVVTLQSGTyr(3-NO2)R-OH are promising candidates for screening and inhibitor characterization. In the latter substrate, the incorporation of Val at position P5 improved the catalytic efficiency. Based on the obtained results, we present here a reproducible, reliable assay protocol using highly affordable buffer components.
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影响因子：
5
作者：
Grum-Tokars, Valerie;Ratia, Kiira;Begaye, Adrian;Baker, Susan C.;Mesecar, Andrew D.
通讯作者：
Mesecar, Andrew D.
DOI：
10.1074/jbc.m310875200
发表时间：
2004-01-16
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Fan K;Wei P;Feng Q;Chen S;Huang C;Ma L;Lai B;Pei J;Liu Y;Chen J;Lai L
通讯作者：
Lai L
影响因子：
168.9
作者：
Huang, Chaolin;Wang, Yeming;Cao, Bin
通讯作者：
Cao, Bin
通过荧光共振能量转移技术对SARS冠状病毒3C样蛋白酶的酶促活性表征。
影响因子：
8.2
作者：
Chen S;Chen LL;Luo HB;Sun T;Chen J;Ye F;Cai JH;Shen JK;Shen X;Jiang HL
通讯作者：
Jiang HL
SARS冠状病毒主蛋白酶二聚体的酶促活性。
影响因子：
3.5
作者：
Graziano V;McGrath WJ;DeGruccio AM;Dunn JJ;Mangel WF
通讯作者：
Mangel WF