Protocol for performing and optimizing differential scanning fluorimetry experiments.
Protocol for performing and optimizing differential scanning fluorimetry experiments.
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DOI：
10.1016/j.xpro.2023.102688
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发表时间：
2023-12-15
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Gestwicki, Jason E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wu, Taiasean;Hornsby, Michael;Zhu, Lawrence;Yu, Joshua C.;Shokat, Kevan M.;Gestwicki, Jason E.
差示扫描荧光法（DSF）是一种广泛应用于测定纯化蛋白表观熔化温度（Tma）的技术。在这里，我们提出了一个执行和优化DSF实验的协议。我们描述了设计和执行实验、分析数据和优化的步骤。我们提供了典型Tmas和ΔTmas的基准，标准分析条件，以及通常改变的实验变量的上限和下限。我们还详细介绍了DSF的常见陷阱以及避免、识别和克服它们的方法。本协议描述了如何设计和实施一个典型的DSF实验，描述了健壮的DSF数据分析的方法，包括常见的技术问题和故障排除方法，包括计划和解释DSF实验的额外资源，列出了出版商注：开展任何实验协议都需要遵守当地机构的实验室安全和伦理指导方针。差示扫描荧光法（DSF）是一种广泛应用于测定纯化蛋白表观熔化温度（Tma）的技术。在这里，我们提出了一个执行和优化DSF实验的协议。我们描述了设计和执行实验、分析数据和优化的步骤。我们提供了典型Tmas和ΔTmas的基准，标准分析条件，以及通常改变的实验变量的上限和下限。我们还详细介绍了DSF的常见陷阱以及避免、识别和克服它们的方法。
Differential scanning fluorimetry (DSF) is a widely used technique for determining the apparent melting temperature (Tma) of a purified protein. Here, we present a protocol for performing and optimizing DSF experiments. We describe steps for designing and performing the experiment, analyzing data, and optimization. We provide benchmarks for typical Tmas and ΔTmas, standard assay conditions, and upper and lower limits of commonly altered experimental variables. We also detail common pitfalls of DSF and ways to avoid, identify, and overcome them. This protocol describes how to design and conduct a typical DSF experiment The approaches to robust DSF data analysis are described Common technical problems and methods for troubleshooting are included Additional resources for planning and interpreting DSF experiments are listed Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. Differential scanning fluorimetry (DSF) is a widely used technique for determining the apparent melting temperature (Tma) of a purified protein. Here, we present a protocol for performing and optimizing DSF experiments. We describe steps for designing and performing the experiment, analyzing data, and optimization. We provide benchmarks for typical Tmas and ΔTmas, standard assay conditions, and upper and lower limits of commonly altered experimental variables. We also detail common pitfalls of DSF and ways to avoid, identify, and overcome them.
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DOI：
10.3390/bios13030338
发表时间：
2023-03-03
期刊：
Biosensors
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
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