Patch-clamping Drosophila sensory neurons.
Patch-clamping Drosophila sensory neurons.
复制标题
膜片钳果蝇感觉神经元。
DOI：
10.1007/978-1-62703-351-0_30
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Boiko,Nina
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kucher,Volodymyr;Eaton,BenjaminA;Stockand,JamesD;Boiko,Nina
电生理学研究为离子通道蛋白的调控和生理功能提供了重要线索。然而，在体内探测离子通道的活性通常是具有挑战性的。这限制了果蝇这种模式生物对电生理研究的有用性。这是不幸的，因为这些遗传上易受控制的生物代表了强大的研究工具，有助于阐明复杂的生理学问题。在这里，我们描述了一种最近开发的方法来记录离子通道活动在果蝇感觉神经元。这种方法是基于来自果蝇胚胎的补丁夹紧初级神经元培养。这样的培养可以研究不同遗传背景下的离子通道。除了描述如何从果蝇胚胎中制备原代神经元细胞培养物外，我们还讨论了应用膜片钳技术分析培养的IV类多树突状（md）感觉神经元中的Na+电流。用全细胞电流箝位法揭示了md感觉神经元的兴奋性，表现为动作电位放电。电压箝位IV类神经元显示电压门控Na+通道的活性，处于麻痹状态。此外，具有酸性pH值的IV类神经元激活酸感应向内Na+电流。对果蝇的基因操作与电生理活动读数相结合，确定了Deg/ENaC通道家族成员pickpocket1 (Ppk1)，负责在IV类感觉神经元中传导酸感应Na+电流。
Electrophysiological studies provide essential clues about the regulation and physiological function of ion channel proteins. Probing ion channel activity in vivo, though, often is challenging. This can limit the usefulness of such model organisms asDrosophilafor electrophysiological studies. This is unfortunate because these genetically tractable organisms represent powerful research tools that facilitate elaboration of complex questions of physiology. Here, we describe a recently developed method for recording ion channel activity inDrosophilasensory neurons. This approach is based on patch-clamping primary neuron cultures fromDrosophilaembryos. Such cultures allow the study of ion channels in different genetic backgrounds. In addition to describing how to prepare a primary neuronal cell culture fromDrosophilaembryos, we discuss, as an example of utility, analysis of Na+currents in cultured class IV multidendritic (md) sensory neurons with the patch clamp technique. Excitability of md sensory neurons, manifested as action potential firing, is revealed with whole-cell current-clamping. Voltage-clamping class IV md neurons revealed the activity of the voltage-gated Na+channel,paralytic. Moreover, challenging class IV md neurons with acidic pH activates acid-sensing inward Na+currents. Genetic manipulation ofDrosophilacombined with this electrophysiological readout of activity identifies pickpocket1 (Ppk1), a member of the Deg/ENaC channel family, as responsible for conducting an acid-sensing Na+current in class IV md sensory neurons.
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DOI：
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发表时间：
1978
期刊：
Journal of embryology and experimental morphology
影响因子：
--
作者：
D. P. Cross;J. H. Sang
通讯作者：
J. H. Sang
影响因子：
3.7
作者：
R. Seecof;R. Unanue
通讯作者：
R. Unanue
影响因子：
64.8
作者：
HONG, KS;DRISCOLL, M
通讯作者：
DRISCOLL, M
从中原肠阶段果蝇胚胎中制备神经元培养物。
DOI：
10.3791/226
发表时间：
2007
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Sicaeros,Beatriz;O'Dowd,DianeK
通讯作者：
O'Dowd,DianeK
在化学成分确定的培养基中生长的胚胎果蝇神经元的电压门控电流和放电特性。
DOI：
10.1002/neu.480270111
发表时间：
1995
期刊：
Journal of neurobiology.
影响因子：
--
作者：
O'Dowd,DK
通讯作者：
O'Dowd,DK