Combined Application of Orthogonal Sortases and Depsipeptide Substrates for Dual Protein Labeling.
Combined Application of Orthogonal Sortases and Depsipeptide Substrates for Dual Protein Labeling.
复制标题
联合应用正交分类酶和去肽底物进行双重蛋白质标记。
DOI：
10.1021/acs.bioconjchem.2c00411
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发表时间：
2022-12-21
影响因子：
4.7
通讯作者：
Webb ME
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Morgan HE;Arnott ZLP;Kamiński TP;Turnbull WB;Webb ME
金黄色葡萄球菌分选酶A是一种转肽酶，已被广泛用于蛋白质的位点特异性修饰，最初用于将含有LPXTG识别序列的标记试剂连接到具有N-末端甘氨酸的蛋白质或肽上。还报道了具有其他识别序列的分选酶突变体，但在所有情况下，转肽反应的可逆性限制了分选酶介导的标记反应的效率。对于野生型分选酶，缩肽底物，其中易断裂的肽键被酯取代，允许有效地不可逆的分选酶介导的标记，因为醇副产物是差的竞争亲核试剂。在本文中，使用缩肽底物进化分选酶变体的报道。底物特异性的三个分选酶进行了研究，允许识别的正交对酶接受LPEToG和LPESoG缩肽，已被应用于双N-末端标记的模型蛋白突变体含有第二个，潜在的N-末端甘氨酸残基。该方法提供了一种有效的正交位点特异性标记技术，进一步扩展了生化蛋白质标记工具包。
Staphylococcus aureus sortase A is a transpeptidase that has been extensively exploited for site-specific modification of proteins and was originally used to attach a labeling reagent containing an LPXTG recognition sequence to a protein or peptide with an N-terminal glycine. Sortase mutants with other recognition sequences have also been reported, but in all cases, the reversibility of the transpeptidation reaction limits the efficiency of sortase-mediated labeling reactions. For the wildtype sortase, depsipeptide substrates, in which the scissile peptide bond is replaced with an ester, allow effectively irreversible sortase-mediated labeling as the alcohol byproduct is a poor competing nucleophile. In this paper, the use of depsipeptide substrates for evolved sortase variants is reported. Substrate specificities of three sortases have been investigated allowing identification of an orthogonal pair of enzymes accepting LPEToG and LPESoG depsipeptides, which have been applied to dual N-terminal labeling of a model protein mutant containing a second, latent N-terminal glycine residue. The method provides an efficient orthogonal site-specific labeling technique that further expands the biochemical protein labeling toolkit.
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DOI：
10.1016/bs.apcsb.2017.04.008
发表时间：
2017
影响因子：
--
作者：
Jacobitz AW;Kattke MD;Wereszczynski J;Clubb RT
通讯作者：
Clubb RT
影响因子：
4.7
作者：
Hess, Gaelen T.;Guimaraes, Carla P.;Spooner, Eric;Ploegh, Hidde L.;Belcher, Angela M.
通讯作者：
Belcher, Angela M.
影响因子：
4.7
作者：
Le Gall CM;van der Schoot JMS;Ramos-Tomillero I;Khalily MP;van Dalen FJ;Wijfjes Z;Smeding L;van Dalen D;Cammarata A;Bonger KM;Figdor CG;Scheeren FA;Verdoes M
通讯作者：
Verdoes M
DOI：
10.1073/pnas.1411179111
发表时间：
2014-09-16
影响因子：
11.1
作者：
Dorr, Brent M.;Ham, Hyun Ok;Liu, David R.
通讯作者：
Liu, David R.
DOI：
10.1073/pnas.1101046108
发表时间：
2011-07-12
影响因子：
11.1
作者：
Chen, Irwin;Dorr, Brent M.;Liu, David R.
通讯作者：
Liu, David R.