Dual Site-Specific Chemoenzymatic Antibody Fragment Conjugation Using CRISPR-Based Hybridoma Engineering.
Dual Site-Specific Chemoenzymatic Antibody Fragment Conjugation Using CRISPR-Based Hybridoma Engineering.
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DOI：
10.1021/acs.bioconjchem.0c00673
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发表时间：
2021-02-17
影响因子：
4.7
通讯作者：
Verdoes M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Le Gall CM;van der Schoot JMS;Ramos-Tomillero I;Khalily MP;van Dalen FJ;Wijfjes Z;Smeding L;van Dalen D;Cammarata A;Bonger KM;Figdor CG;Scheeren FA;Verdoes M
功能化抗体和抗体片段已在生物医学成像、治疗诊断和抗体药物偶联物 (ADC) 领域得到应用。此外，治疗和治疗诊断方法受益于向靶细胞递送不止一种类型的货物的可能性，进一步挑战随机标记策略。因此，需要生物缀合方法来可重复地获得带有多种不同货物分子的确定的均质缀合物，而不损害目标亲和力。在这里，我们描述了一种基于 CRISPR/Cas9 的简单策略，可快速改造杂交瘤细胞，使其分泌带有两个不同位点特异性标记基序的 Fab' 片段，这些片段可以通过两种不同的分选酶 A 突变体分别进行修饰。我们表明，对重链 (HC) 和轻链 (LC) 基因座进行连续基因编辑能够产生稳定的细胞系，该细胞系分泌双标记 Fab' 分子 (DTFab')，并且可以轻松分离。为了证明可行性，我们以特定地点的方式使用两种不同的货物对 DTFab' 进行功能化。该技术平台对于多模式成像剂、治疗诊断学和下一代 ADC 的开发具有重要价值。
Functionalized antibodies and antibody fragments have found applications in the fields of biomedical imaging, theranostics, and antibody–drug conjugates (ADC). In addition, therapeutic and theranostic approaches benefit from the possibility to deliver more than one type of cargo to target cells, further challenging stochastic labeling strategies. Thus, bioconjugation methods to reproducibly obtain defined homogeneous conjugates bearing multiple different cargo molecules, without compromising target affinity, are in demand. Here, we describe a straightforward CRISPR/Cas9-based strategy to rapidly engineer hybridoma cells to secrete Fab′ fragments bearing two distinct site-specific labeling motifs, which can be separately modified by two different sortase A mutants. We show that sequential genetic editing of the heavy chain (HC) and light chain (LC) loci enables the generation of a stable cell line that secretes a dual tagged Fab′ molecule (DTFab′), which can be easily isolated. To demonstrate feasibility, we functionalized the DTFab′ with two distinct cargos in a site-specific manner. This technology platform will be valuable in the development of multimodal imaging agents, theranostics, and next-generation ADCs.
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影响因子：
14.8
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
3.2
作者：
De Rosa, Lucia;Cortajarena, Aitziber L.;D'Andrea, Luca Domenico
通讯作者：
D'Andrea, Luca Domenico
影响因子：
3.7
作者：
Beerli RR;Hell T;Merkel AS;Grawunder U
通讯作者：
Grawunder U
DOI：
10.1073/pnas.1411179111
发表时间：
2014-09-16
影响因子：
11.1
作者：
Dorr, Brent M.;Ham, Hyun Ok;Liu, David R.
通讯作者：
Liu, David R.
影响因子：
1.2
作者：
Albers, Andreas E.;Grabow, Regina;Pecher, Gabriele
通讯作者：
Pecher, Gabriele