A high-content endogenous GLUT4 trafficking assay reveals new aspects of adipocyte biology.
A high-content endogenous GLUT4 trafficking assay reveals new aspects of adipocyte biology.
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高含量内源性GLUT4运输试验揭示了脂肪细胞生物学的新方面。
DOI：
10.26508/lsa.202201585
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发表时间：
2023-01
影响因子：
4.4
通讯作者：
Burch, James
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Diaz-Vegas, Alexis;Norris, Dougall M.;Jall-Rogg, Sigrid;Cooke, Kristen C.;Conway, Olivia J.;Shun-Shion, Amber S.;Duan, Xiaowen;Potter, Meg;van Gerwen, Julian;Baird, Harry J. M.;Humphrey, Sean J.;James, David E.;Fazakerley, Daniel J.;Burch, James
作者描述了一种高通量方法，用于测量脂肪细胞中内源性GLUT4和转铁蛋白受体易位。他们揭示，这种方法比使用过表达的GLUT4报告基因研究GLUT4贩运具有优势，这是该领域常用的方法。胰岛素诱导的GLUT4转运至肌肉和脂肪细胞的质膜对于全身葡萄糖稳态至关重要。目前，GLUT4运输测定依赖于标记的GLUT4的过表达。在这里，我们描述了一个高内容的成像平台，研究内源性GLUT4易位在完整的脂肪细胞。该方法能够高保真分析GLUT4对特定扰动的反应，其他运输蛋白和其他特征（包括脂滴形态）的多重分析。使用这种多重方法，我们发现Vps45和Rab14是GLUT 4的选择性调节因子，但Trarg1，Stx6，Stx16，Tbc1d4和Rab10敲低影响GLUT 4和TfR易位。因此，GLUT4和TfR易位机制可能在胰岛素刺激后有一些重叠。此外，我们确定了Kif13A，Rab10结合分子马达，作为一种新的GLUT4交通调节剂。最后，内源性过表达GLUT4的比较突出了内源性GLUT4方法对遗传扰动的敏感性增强，并强调了研究内源性蛋白质运输用于药物发现和相关细胞类型中胰岛素作用的遗传分析的优势。
The authors describe a high-throughput method for measuring endogenous GLUT4 and transferrin receptor translocation in adipocytes. They reveal that this method has advantages over studying GLUT4 trafficking using overexpressed GLUT4 reporters, which are commonly used in the field. Insulin-induced GLUT4 translocation to the plasma membrane in muscle and adipocytes is crucial for whole-body glucose homeostasis. Currently, GLUT4 trafficking assays rely on overexpression of tagged GLUT4. Here we describe a high-content imaging platform for studying endogenous GLUT4 translocation in intact adipocytes. This method enables high fidelity analysis of GLUT4 responses to specific perturbations, multiplexing of other trafficking proteins and other features including lipid droplet morphology. Using this multiplexed approach we showed that Vps45 and Rab14 are selective regulators of GLUT4, but Trarg1, Stx6, Stx16, Tbc1d4 and Rab10 knockdown affected both GLUT4 and TfR translocation. Thus, GLUT4 and TfR translocation machinery likely have some overlap upon insulin-stimulation. In addition, we identified Kif13A, a Rab10 binding molecular motor, as a novel regulator of GLUT4 traffic. Finally, comparison of endogenous to overexpressed GLUT4 highlights that the endogenous GLUT4 methodology has an enhanced sensitivity to genetic perturbations and emphasises the advantage of studying endogenous protein trafficking for drug discovery and genetic analysis of insulin action in relevant cell types.
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GLUT4储存囊泡的蛋白质组学分析揭示了抑制肿瘤候选者5（TUSC5）是脂肪细胞中胰岛素作用的新调节剂。
DOI：
10.1074/jbc.m115.657361
发表时间：
2015-09-25
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Fazakerley DJ;Naghiloo S;Chaudhuri R;Koumanov F;Burchfield JG;Thomas KC;Krycer JR;Prior MJ;Parker BL;Murrow BA;Stöckli J;Meoli CC;Holman GD;James DE
通讯作者：
James DE
Rab10 和肌球蛋白-Va 介导脂肪细胞中胰岛素刺激的 GLUT4 储存囊泡易位
DOI：
10.1083/jcb.201111091
发表时间：
2012-08-20
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Chen Y;Wang Y;Zhang J;Deng Y;Jiang L;Song E;Wu XS;Hammer JA;Xu T;Lippincott-Schwartz J
通讯作者：
Lippincott-Schwartz J
影响因子：
4.1
作者：
Brewer, Paul Duffield;Habtemichael, Estifanos N.;Mastick, Cynthia Corley
通讯作者：
Mastick, Cynthia Corley
TUSC5通过调节GLUT4回收来调节胰岛素介导的脂肪组织葡萄糖摄取。
影响因子：
8.1
作者：
Beaton N;Rudigier C;Moest H;Müller S;Mrosek N;Röder E;Rudofsky G;Rülicke T;Ukropec J;Ukropcova B;Augustin R;Neubauer H;Wolfrum C
通讯作者：
Wolfrum C
DOI：
10.1111/j.2517-6161.1995.tb02031.x
发表时间：
1995-01-01
影响因子：
5.8
作者：
BENJAMINI, Y;HOCHBERG, Y
通讯作者：
HOCHBERG, Y