Correlative VIS-fluorescence and soft X-ray cryo-microscopy/tomography of adherent cells.
Correlative VIS-fluorescence and soft X-ray cryo-microscopy/tomography of adherent cells.
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DOI：
10.1016/j.jsb.2011.12.012
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发表时间：
2012-02
影响因子：
3
通讯作者：
Gruenewald, Kay
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hagen, Christoph;Guttmann, Peter;Klupp, Barbara;Werner, Stephan;Rehbein, Stefan;Mettenleiter, Thomas C.;Schneider, Gerd;Gruenewald, Kay
关键词：
玻璃体样品的软X射线冷冻显微镜/断层摄影术正在成为结构细胞生物学中有价值的工具。在“水窗”波长范围内（2.34-4.37 nm），它提供了具有高信噪比和几十纳米分辨率的吸收对比图像。具有接近氧的K吸收边缘的波长的软X射线穿透厚度在微米范围内的生物样品。在这里，我们报告的应用程序最近建立的扩展的透射软X射线低温显微镜（HZB TXM）在BESSY II电子存储环的束线U41-XM的柱落射荧光和反射光低温显微镜。我们展示了相关荧光和软X射线冷冻显微镜/断层扫描的新能力，该仪器沿着一个典型的生命科学实验方法-荧光标记蛋白质的相关性（伪狂犬病病毒的pUL 34-GFP，PrV，疱疹病毒科的核出口复合物的核膜锚定组分，其与病毒pUL 31相互作用）在共表达PrV pUL 34-GFP/pUL 31的哺乳动物细胞中，细胞核中存在病毒诱导的囊泡结构，扩大核浆网。两者合计，我们的研究结果表明，新的可能性，以研究特定蛋白质的粘附细胞的亚结构中的作用，特别是细胞核中的toto，访问电子显微镜在薄的样品。
Soft X-ray cryo-microscopy/tomography of vitreous samples is becoming a valuable tool in structural cell biology. Within the ‘water-window’ wavelength region (2.34–4.37 nm), it provides absorption contrast images with high signal to noise ratio and resolution of a few tens of nanometer. Soft X-rays with wavelengths close to the K-absorption edge of oxygen penetrate biological samples with thicknesses in the micrometer range. Here, we report on the application of a recently established extension of the transmission soft X-ray cryo-microscope (HZB TXM) at the beamline U41-XM of the BESSY II electron storage ring by an in-column epi-fluorescence and reflected light cryo-microscope. We demonstrate the new capability for correlative fluorescence and soft X-ray cryo-microscopy/tomography of this instrument along a typical life science experimental approach – the correlation of a fluorophore-tagged protein (pUL34-GFP of pseudorabies virus, PrV, the nuclear membrane-anchored component of the nuclear egress complex of the Herpesviridae which interacts with viral pUL31) in PrV pUL34-GFP/pUL31 coexpressing mammalian cells, with virus-induced vesicular structures in the nucleus, expanding the nucleoplasmic reticulum. Taken together, our results demonstrate new possibilities to study the role of specific proteins in substructures of adherent cells, especially of the nucleus in toto, accessible to electron microscopy in thinned samples only.
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DOI：
10.1073/pnas.0701757104
发表时间：
2007-04-24
影响因子：
11.1
作者：
Klupp, Barbara G.;Granzow, Harald;Mettenleiter, Thomas C.
通讯作者：
Mettenleiter, Thomas C.
影响因子：
3
作者：
Kremer, JR;Mastronarde, DN;McIntosh, JR
通讯作者：
McIntosh, JR
影响因子：
3
作者：
Agronskaia, Alexandra V.;Valentijn, Jack A.;Gerritsen, Hans C.
通讯作者：
Gerritsen, Hans C.
影响因子：
2.5
作者：
Ponomarenko, O.;Nikulin, A. Y.;Sakata, O.
通讯作者：
Sakata, O.
轴突运输过程中单纯疱疹病毒的冷冻电子断层扫描和原发性神经元中的次级包膜。
影响因子：
6.7
作者：
Ibiricu I;Huiskonen JT;Döhner K;Bradke F;Sodeik B;Grünewald K
通讯作者：
Grünewald K