Highly Efficient CRISPR/Cas9-Mediated Genome Editing in Human Pluripotent Stem Cells.
Highly Efficient CRISPR/Cas9-Mediated Genome Editing in Human Pluripotent Stem Cells.
复制标题
DOI：
10.1002/cpz1.590
复制
发表时间：
2022-11
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
French, Deborah L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Maguire, Jean Ann;Gadue, Paul;French, Deborah L.
关键词：
人类PSCs在基础生物学和基于细胞的治疗多种疾病方面都具有巨大的潜力。使用CRISPR/Cas9技术操纵这些细胞基因组的能力通过提供一个有价值的工具来设计或纠正与疾病相关的突变，从而扩大了这一潜力。由于CRISPR/Cas9产生靶向双链断裂的效率很高，一个主要的挑战是在一个等位基因上引入精确的遗传修饰，而不在非靶标等位基因上形成插入。为了克服这一障碍，我们描述了两个寡核苷酸修复模板的使用：一个表达序列变化，另一个保持正常序列。此外，我们简化了转染和筛选方法，使该方案在细胞数量较少的情况下有效，并限制了劳动密集型克隆传代的数量。该协议提供了一种技术上简单的方法，用于生成有价值的工具来在干细胞中模拟人类疾病。基本方案1：在人类PSCs中实现基于CRISPR的基因组编辑基本方案2：使用双ODN CRISPR/Cas9重组系统对人PSCs进行遗传修饰
Human PSCs hold tremendous potential for both basic biology and cell-based therapies for a wide variety of diseases. The ability to manipulate the genome of these cells using the CRISPR/Cas9 technology has expanded this potential by providing a valuable tool to engineer or correct disease-associated mutations. Because of the high efficiency by which CRISPR/Cas9 creates targeted double strand breaks, a major challenge has been the introduction of precise genetic modifications on one allele, without indel formation on the non-targeted allele. To overcome this obstacle, we describe the use of two oligonucleotide repair templates: one expressing the sequence change and the other maintaining the normal sequence. In addition, we have streamlined both the transfection and screening methodology to make this protocol efficient with small numbers of cells and limiting the amount of labor-intensive clone passaging. This protocol provides a technically simple approach for generating valuable tools to model human disease in stem cells. BASIC PROTOCOL 1: Implementation of CRISPR based genome editing in human PSCs BASIC PROTOCOL 2: Genetic modification of human PSCs using a double ODN CRISPR/Cas9 recombination system
登录
查看更多内容
影响因子：
--
作者：
Giacalone, Joseph C;Sharma, Tasneem P;Tucker, Budd A
通讯作者：
Tucker, Budd A
影响因子：
--
作者：
Voytas, D
通讯作者：
Voytas, D
用于 CRISPR/Cas9 基因组编辑的 Cas9 核糖核蛋白的递送策略。
影响因子：
12.4
作者：
Zhang S;Shen J;Li D;Cheng Y
通讯作者：
Cheng Y
DOI：
10.1089/crispr.2020.0053
发表时间：
2020-12
期刊：
The CRISPR journal
影响因子：
--
作者：
Chaudhari HG;Penterman J;Whitton HJ;Spencer SJ;Flanagan N;Lei Zhang MC;Huang E;Khedkar AS;Toomey JM;Shearer CA;Needham AW;Ho TW;Kulman JD;Cradick TJ;Kernytsky A
通讯作者：
Kernytsky A
影响因子：
--
作者：
Bloch, K D;Grossmann, B
通讯作者：
Grossmann, B