MiniVIPER Is a Peptide Tag for Imaging and Translocating Proteins in Cells.
MiniVIPER Is a Peptide Tag for Imaging and Translocating Proteins in Cells.
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DOI：
10.1021/acs.biochem.0c00526
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发表时间：
2020-08-25
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Beatty KE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Doh JK;Tobin SJ;Beatty KE
显微镜使研究人员能够在细胞范围内询问蛋白质。为了提供蛋白质特异性的对比，我们开发了一类新的遗传编码的多肽标签，称为多功能相互作用多肽(VIP)标签。VIP标签通过在多肽标签和外源添加的探针肽之间形成异二聚体将报告递送到目标蛋白。我们在这里报道了一种新的VIP标签，命名为MiniVIPER，它由Minie-mini R异源二聚体组成。我们首先通过标记三个细胞靶标：转铁蛋白受体1(TfR1)、组蛋白H2B和线粒体蛋白TOMM20来证明MiniVIPER的选择性。我们证明了minie或mini R都可以作为遗传编码的标签。接下来，我们通过生成五个光谱不同的探测肽来标记活细胞上标记的TfR1，从而展示了MiniVIPER的多功能性。最后，我们演示了VIP标签的两个新应用。首先，我们将MiniVIPER与另一个VIP标签Viper结合使用，在单个细胞中选择性地标记两种不同的蛋白质(例如，TfR1带有H2B或TOMM20)。其次，我们使用MiniVIPER通过mCherry与H_2B-mEmerald的原位二聚将荧光蛋白转移到细胞核。总之，MiniVIPER是一种新的多肽标签，可以实现细胞中蛋白质的多靶点成像和人工二聚。
Microscopy allows researchers to interrogate proteins within a cellular context. To deliver protein-specific contrast, we developed a new class of genetically encoded peptide tags called versatile interacting peptide (VIP) tags. VIP tags deliver a reporter to a target protein via the formation of a heterodimer between the peptide tag and an exogenously added probe peptide. We report herein a new VIP tag named MiniVIPER, which is comprised of a MiniE–MiniR heterodimer. We first demonstrated the selectivity of MiniVIPER by labeling three cellular targets: transferrin receptor 1 (TfR1), histone protein H2B, and the mitochondrial protein TOMM20. We showed that either MiniE or MiniR could serve as the genetically encoded tag. Next, we demonstrated MiniVIPER’s versatility by generating five spectrally distinct probe peptides to label tagged TfR1 on live cells. Lastly, we demonstrated two new applications for VIP tags. First, we used MiniVIPER in combination with another VIP tag, VIPER, to selectively label two different proteins in a single cell (e.g., TfR1 with H2B or TOMM20). Second, we used MiniVIPER to translocate a fluorescent protein to the nucleus through in situ dimerization of mCherry with H2B-mEmerald. In summary, MiniVIPER is a new peptide tag that enables multitarget imaging and artificial dimerization of proteins in cells.
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影响因子：
15
作者：
Halo TL;Appelbaum J;Hobert EM;Balkin DM;Schepartz A
通讯作者：
Schepartz A
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作者：
Dempsey, Graham T.;Vaughan, Joshua C.;Chen, Kok Hao;Bates, Mark;Zhuang, Xiaowei
通讯作者：
Zhuang, Xiaowei
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作者：
Fernandez-Suarez, Marta;Baruah, Hemanta;Ting, Alice Y.
通讯作者：
Ting, Alice Y.
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作者：
Mason, JM;Arndt, KM
通讯作者：
Arndt, KM
DOI：
10.1093/protein/15.11.871
发表时间：
2002-11-01
期刊：
PROTEIN ENGINEERING
影响因子：
--
作者：
George, RA;Heringa, J
通讯作者：
Heringa, J